体外培养人视网膜微血管内皮细胞屏障功能的研究.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(4)：749—754 · 749 · [文章编号] 1000—4718(2009)04—0749—06 体外培养人视网膜微血管内皮 细胞屏障功能的研究水 李建桥 ， 江静波 ， 罗 燕 ， 刘清云 ， 肖 伟 ， 史 煜 ， 马红婕 ， 唐仕波 (中山大学中山眼科 中心，国家眼科学重点实验室，广东 广州 510060； 山东大学齐鲁医院眼科，山东 济南 252000；广东省妇幼保健院新生儿科，广东 广州 510010) [摘 要] 目的：研究原代培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能。方法 ：对人视网膜微血管内皮细胞进 行原代培养并鉴定 ，第4代细胞接种于Polyester(PET)膜上，不同时点对滤膜表面行显微镜观察 ，通过紧密连接相 关蛋白occludin的表达，间接反映细胞之间紧密连接的形成，应用共聚焦免疫显微镜观察2、3、4周occludin表达的 变化；跨膜电阻(TER)检测屏障的稳定性，并通过测量正常培养条件和5 g／L的血管内皮生长因子 (VEGF)干预 下辣根过氧化物酶(HRP)通透性的改变反映屏障特性。结果：成功培养了人视 网膜微血管内皮细胞，纯度可达 95．8％。细胞接种 1周后融合为单层，接种后2、3、4周细胞密度无明显变化，细胞接触紧密，呈单层生长，可见 occludin在细胞相邻边界规则的表达；occludin在2、3、4周 ，在细胞内的分布逐渐移向相邻细胞交界处 ；2周时视 网 膜微血管内皮细胞跨上皮细胞电阻达 (120．62±3．97)DVcm ，2、3、4周差异无显著(P0．05)；单层细胞的通透性 检测结果显示，HRP从滤膜上方到达下方随时间延长呈线性增加 ，且在VEGF的干预下，各时点通透率明显增加 (P 0．05)。结论：利用体外培养的人原代视网膜微血管内皮细胞建立单层细胞具有典型的屏障功能特性，可作为 体外研究血视网膜内屏障的有用模型。 [关键词] 血管内皮细胞；细胞培养 ；血视网膜屏障 [中图分类号] R363 [文献标识码】 A Barrl’erfunctionofhumanretinal m icrovascularendothelialcellscultured ／n vitro LIJian—qiao ，JIANGJing—bo。， LUOYan，ⅡUQing—yun，XIAOWei，SHIYu， MAHong—iie，TANGShi—b0 (StateKeyLaboratoryofOphthalmology，ZhongshanOphthalmicCenter，SunYat—senUniversity，Guangzhou510060， China；DepartmentofOphthalmology，QiluHospitalofShandongUniversity， Mn252000，China；DepartmentofNeo— na te，GuangdongProvinceWome nandChildrensHospital，Guangzhou510010，China．E—mail：tangsb@ ma il．sysu．edu． cn) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheblood—retinalbarrier(BRB)functionofhumanretinalmicr0vascular cells(hRMECs)culturedinvitro．METHODS：PrimaryhRMECswereculturednadidentified．Thefourthgenerationwas inoculatedinamicroperousfilterwitIlhtefiltermembraneofPolyester(PET)．Cellsonhtesurfaceoffiltermembrnaewas observedbyphasemicroscopeatdifferenttimepoints，nadoccludinstainingwas