体外分化胚胎干细胞为造血干细胞重建造血功能的研究.pdfVIP

· 1610· 呈 蠢 』 lofPathophysiology 2008。24(8)：1610—1615 [文章编号】 1000—4718(2008)08—1610—06 体外分化胚胎干细胞为造血干细胞重建 造血功能的研究木 何志旭’， 林 槟’， 黄绍 良 ， 米 蔷 ， 黄 景’ (‘贵阳医学院干细胞研究中心 ，附院儿科 ，贵州 贵阳550001；中山大学第二附属医院儿科 ，广东 广州510080) [摘 要】 目的：探讨体外定向分化胚胎干细胞 (ESCs)为造血干细胞 (HSCs)对体内造血功能的重建作用。 方法：将小鼠E14．1胚胎干细胞采用 “三步诱导法”在体外分化发育为HSCs，造血克隆形成 (CFU)实验观察其体外 造血集落形成情况，免疫磁珠分选纯化HSCs移植给经亚致死剂量 ．y射线照射的雌性SCID小鼠，观察其植入及小 鼠造血功能恢复情况。结果：经过分阶段诱导，多种造血刺激因子联合应用能有效促进ESCs定 向分化发育为 HSCs，流式细胞仪检测HSCs特异性表面标志物CD34 ／esa—I表达最高为 (58．64±4．20)％，CFU培养能形成较 多的红系、粒系／巨噬细胞系及混合细胞集落，Wright—Giemsa染色显示为原始的造血细胞。此阶段的HSCs经分 选纯化后移植给经 ．y射线照射后的小鼠，移植组小鼠+10d造血功能开始恢复，观察40d后除血小板恢复较慢外 ， 白细胞、红细胞、血红蛋白等指标已接近正常，植入率为71．4％，存活率为43．0％，染色体检测证实已由受体鼠的 XX转为供体鼠的XY。结论：采用分阶段诱导的方法，可在体外定向诱导小鼠ESCs分化发育为HSCs，此来源的 HSCs可以有效重建体内造血功能。 【关键词】 胚胎干细胞；造血干细胞；细胞移植 [中图分类号】 R329．28 [文献标识码】 A ／nvitrohematopoieticstem cellsfrom embryonic stem cellsreconstruct hem atopoiesisin m ice HEZhi—xu，LINBing，HUANGShao—liang，MIQiang，HUANGJing (StemCellResearchCenterofGuiyangMedicalCollege，Guiyang550001，China；DepartmentofPediatric，TheSecond A~liatedHospiml，SunYat—senUnivemi~，Guangzhou510080，hCina．E—mail：Hezx306@yahoo．corn．ca) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatethepotentialofhematopoieticstemceHs(HSCs)derivedfrommouseembry— onicstemcells(ESCs)toreconstructhematopoiesisinvivo．METHODS：Usingathree—stepmethod，amiceembryonic stem cellline，E14．1wasinducedintohematopoieticstem cells．Theceil．markerswiht CD34 ／Sea一1 wereidentified byflowcytometryanalysis，thenHSCs(1×10cells／L)fromthird—stepwereinjectedintoSCIDmiceforobservingtera- tomaformation．TovalidatefunctionofHSCs，colonogeniccellassaywas conductedna dthehematopoiesisinleth