幽门螺杆菌对大鼠胃上皮细胞环氧合酶-2表达的影响.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(3)：59 = ! · 595 · [文章编号] 1000—4718(2007)03-0595—03 · 短篇论著 · 幽门螺杆菌对大鼠胃上皮细胞环 氧合酶 一2表达的影响 沈 洪 ， 孙为豪 ， 吴爱娟 ， 许海尘 ， 邵 耘 ， 肖 斌 ， 薛绮萍 ， 丁国宪 ， 程蕴琳 (南京中医药大学附属江苏省中医院消化科，南京医科大学第一附属医院老年医学科，江苏 南京210029) [摘 要] 目的：探讨幽门螺杆菌(Hp)水提取物对大鼠胃上皮细胞环氧合酶 一2(COX一2)表达及前列腺素 E (PGE)合成的影响。方法：大鼠胃上皮细胞株 RGM1体外常规培养 ，Hp组细胞培养液内Hp水提取物终浓度为 2．5ms／L、5ms／L、10ms／L，大肠埃希菌组大肠埃希菌水提取物终浓度 10ms／L。培养 24h后收集细胞和上清液 分别用于Westernblotting分析COX一1、COX一2表达和酶免疫方法测定前列腺素E (PGE)含量。结果：Hp水提 取物剂量依赖地增加 RGM1细胞COX一2表达但不影响COX一1表达，而大肠埃希菌水提取物对COX一1和COX 一 2表达均无明显影响。RGM1细胞培养上清液中PGE 水平在 Hp组 (2．5、5、10ms／L)和大肠埃希菌组分别为 (23o．70-t-48．55)ng／gprotein、(291．82-4-33．49)ng／gprotein、(342．94-4-28．70)ng／gprotein和 (130．54-4-42．81)ng／g protein。结论：Hp体外诱导大鼠胃上皮细胞COX一2表达而增加 PGE合成，Hp感染的致癌机制可能与其诱导的 COX一2表达有关。 [关键词] 螺杆菌 ，幽门；环氧合酶一2；前列腺素E类；大鼠；胃 [KEYWORDS] Helicobacterpylori；Cyclooxygenase一2；ProstaglandinsE；Rats；Stomach [中图分类号] R363 [文献标识码] A 胃癌是最常见的消化系统恶性肿瘤 ，其发病率位于恶性 剂盒购 自美国Pierce公司；马血液购 自美国 BBL公司；苯 甲 肿瘤的第2位。流行病学资料提示幽门螺杆菌 (Helicobacter 磺酰 氟 (phenylmethylsulfonylfluoride，PMSF)和抑 肽 酶 lrylori，np)感染是胃癌发生 的重要病因之一 ，但其确切的致 (aprotinin)购 自美国Sigma公司。山羊抗大 鼠COX—l、COX 癌机制尚不清楚。环氧合酶 (cyclooxygenase，COX)是前列腺 一 2的多克隆抗体购 自美国SantaCruze公司；辣根过氧化物 素 (prostaglandina，PGs)合成的限速酶，已知 COX至少有两 酶标记的抗山羊 IgG抗体购 自丹麦 DAKO公司；PVDF膜和 种亚型，即COX一1和 COX一2。国内外的研究表明，COX一2 ECL化学发光试剂盒购 自英国Amershma 公司。PGE 酶免 表达在 胃粘膜癌变过程中起重要作用…。Hp感染者 胃粘膜 疫测定 (EIA)试剂盒购 自美国Caymna 公司；其它试剂为国产 COX一2表达增加…，体外实验显示 Hp诱导MKN28胃癌细 分析纯级。酶联免疫检测仪 (DG3022A型)为南京华东电子 胞系COX一2mRNA表达并增加 PGE 的合成 。然而，Hp 管厂产品；半干式电泳转录仪为美国Bio—Rad公司产品。 对正常胃上皮细胞 COX一2蛋白表达和 PGE 合成的影响， 2 方法 文献报道不多。本研究探讨Hp菌体水提取物对正常大鼠胃 2．1 Hp培养及茵体水提取物的制备 将 CagA 和 VacA 粘膜上皮细胞系(RGM1)COX一1、COX一2表达及 PGE 合成 的Hp菌株ATFCC43540 接种于含5％马血的布氏琼脂平板 ， 的影响。 置37 微需氧环境 (5％O2、10％CO2、85％N2)中培养，3d后