高效液相色谱法测定尿中多胺.pdfVIP

应用实例 高效液相色谱法测定尿 中多胺 张和顺 李胜芝 天（津市泌尿外科研究所） 自1971年Russell[1]首先报道肿瘤患者尿中多 一（）仪器和试剂 胺 腐（胺、精脒、精胺）排出量比正常人增多，此 1．仪器：岛津LC-3A型液相色谱仪；荧光 后许多研究报道已证实多胺与肿瘤的生长及其临床 检测器FLD-1数据处理机C-R1B。 诊断密切相关[1-6]。所以国内外相继建立了许多测 2．试剂；腐胺、精脒系Fluka产品，精胺为 定多胺的方法。 Aldrich产品，DNS-Cl为美国Sima产品。001 1 张任恩等[7]利用5-二甲基萘-1-磺酰氯(DNS- 阳离子交换树脂为南开大学化工厂提供。其它试 剂 Cl)柱前衍生样品，通过反相液相色谱 R（P-HPL 均为国产分析纯。蒸馏水为全玻璃器重蒸馏无离子 C）分析多胺获得满意的结果，而本文则运用HPLC 水。 方法测定尿中多胺。 二（）样品的采集及预分离 基本按照胡继旺等[5]的方法收集预分离样品， 实 验 部 分 不同的是我们改用001 1型树脂代替Dowex-50 进口树脂。将含有多胺的洗脱液部分置沸水浴蒸 精密度测定是利用同一份样品重复测定11次，求得 干，残渣再溶于1ml水中，调PH9.5—10.5,待衍生化。 变异系数(CV):腐胺2.83％，精脒2.18％，精胺 5.77％。 三（）DNS-Cl衍生过程 取预分离后样品0.2m1加入内标物 1（,6-己二 另外，由于采用国产树脂预分离样品，树脂价 胺）10g和0.4mlDNS-Cl试剂 (10mg/ml无水 廉而容易获得，给工作带来很大方便。利用本方法同 丙酮)。混匀后，置70℃水浴30min。补加L-脯氨 样适于测定其它生理体液样品中多胺，操作简便、 酸(125mg/m1)水，501继续15min。反应结束后，置 快速、灵敏，宜于临床推广使用。 40℃水中吹氮气除去丙酮。用甲苯提取多胺衍生 参 考 文 献 物，置真空干燥箱中50蒸干。残渣再溶于0.2ml 甲苯中，取101进行色谱分析。 [1]D.H.Russell,C.C.Levy,S.C.Schimff,I.A. Hawk.,Cancer.Res,31,1555(1971). 结 果 与 讨 论 [2]NikolausSeiler,Clin.Chem.,23(9),1519 (1977). 多胺标准物及样品的HPLC谱图如图1。 [3]T.Skaaden,T.Greibrokk,J.Chromatogr., 定量计算：采用内标标准曲线法定量。标准曲 247,111(1982). 线是以1—5g/ml浓度梯度标准液和1 g的内标物 [4] L.H.Rlchard,B.F.Kenneth,J.W.Lynn,Clin. 一起混合后进行色谱分析。多胺峰面积Ai和内标物 Chem.,30(7),1243(1984). 峰面积As比值A（iAs）为横座标,浓度为纵座标作 [5] 胡继旺、王寒正、刘琼，中华医学检验杂志