牛MYOG基因启动子的克隆和序列分析.pdfVIP

维普资讯 第 34卷 第 8期 西北农林科技大学学报(自然科学版) Vo1．34 No．8 2006年 8月 】r． fNorthwestSci—TechUniv．ofAgri．andFor．(Nat．Sci．Ed．) Aug． 2006 牛MyoG基因启动子的克隆与序列分析 王 珊 ，陈 宏 ，蔡 欣 (1西北农林科技大学 动物科技学院 陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西 杨凌 71210C 2徐州师范大学 生物技术研 究所 ，江苏 徐州 221l16) [摘 要] 根据 GenBank中已公布的人、猪和小鼠的MyoG基因的5侧翼和部分第一外显子序列设计PCR 引物，用touch—downPCR技术扩增了牛MyoG基因的启动子序列 构建了重组克隆载体 pGEM—T—MyoG，并通过 PCR扩增、限制性酶切对阳性克隆进行了鉴定、测序及生物信息学分析。结果表明，牛My oG基因的启动子序列 (Genbank中注册号为AY882581)长度为 672bp，其与猪、人和小鼠相应序列的同源性分别为 94 ，91 和 88 ， 且其在不同物种之间具有一定的保守性。牛My o(；基因启动子的克隆与序列分析为进一步研究牛My o(；基因的表 达调控奠定了基础 。 [关键词] My oG基因；启动子序列 ；序列分析；牛 [中图分类号] Q343 [文献标识码] A [文章编号] 1671-9387(2006)08—0012-05 肌细胞生成素(myogenin，MyoG)基因是成肌调 研究较多，但对牛 MyoG基 因的研究相对较少。为 节 因子 (myogenicregulatoryfactors，MRFs)家族 此，本研究对牛MyoG基因的启动子进行了克隆，并 的成员之一l】]。MRFs家族 由MyoD1，MRF4，MyoG 对其进行了生物信息学分析，以期为牛MyoG基因 和 MyF5组成 j，MyoD1和 MyoG是一类肌调节 的结构、表达调控及其突变与牛产肉性状等方面的 蛋 白，其中MyoD1确定肌源性的发生 ，MyoG诱导 研究提供理论依据 。 骨骼肌的最终分化_3]。MyoG作为一个转录调节 因 1 材料与方法 子，其表达启动了一系列骨骼肌特异的胚胎性受体 和收缩蛋 白(如胚胎型烟碱样 乙酰胆碱受体、胚胎型 1．1 材 料 trponin亚基、胚胎型肌球蛋 白重链等)的合成，因此 1．1．1 血 样 从福建漳州种畜场随机选取 10头 MyoG是惟一的无可替代的成肌调节因子_4]。Wein— 健康的成年闽南公牛，颈静脉采血，血液用ACD抗 traub等 的研究表明，单独敲除MyoG基因的小鼠 凝后，带回实验室低温保存 。 会由于严重的骨骼肌发育缺陷而死亡，而单独敲除 1．1．2 试 剂 LA 7’aqDNA聚合酶与限制性 内 其他 3个基因的小鼠，其骨骼肌均发育成功_5]。作为 切酶 SalI均购 自TaKaRa公司；DNA凝胶纯化试 一 种肌细胞特异性转录因子，MyoG具有 以下功能： 剂盒购 自上海生物工程有 限公司；E．coliDH5a， (1)调节 自身基因的表达；(2)与生肌因子其他成员 pGEM—T—easy载体 ，T DNA连接酶和 X—gal购 自 相互作用 ，如 MyoG基 因可调节 MRF4基 因的表 Promega公司；其他试剂均为国产分析纯。 达 ；(3)调节肌 肉特异基因如肌 肉肌酸激酶、肌钙蛋 1．1．3 引 物 用 ClustalW 软件将 GenBank中 白、肌球蛋 白轻链基 因的表达。可见，MyoG基因的 公布 的人 (Genbank中