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SchistoControl ·437·
中国血吸虫病防治杂志2010年第22卷第5期ChinJ 2010,V01.22,No.5
[文章编号】1005-6661(2010)05-0437-05 ·论著·
抗日本血吸虫重组信号蛋白14—3—3
单克隆抗体的制备和鉴定
钱春艳,余传信。,宋丽君,殷旭仁,王阶,许永良,华万全
【摘要] 目的制备抗日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3单克隆抗体,并鉴定抗体性质。方法以重组表达纯化的日本
血吸虫信号蛋白14_3.3为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验及免疫印迹
法对获得的单克隆抗体进行类和亚类、效价、浓度、纯度、亲和常数、特异性和检测灵敏度的测定与鉴定。结果共获得6
x105,亲和层析纯化后
IgG2a、IgG2h、IgGl和Iggl。对其中的单克隆抗体5G9分析显示,制备的腹水抗体效价为l:1.28
7
的浓度为5.3mg/ml,纯度95%,亲和常数为5.1×10mol/L。免疫印迹试验结果表明,该单克隆抗体可与体外重组表
达纯化的日本血吸虫14—3-3蛋白特异性结合,同时也能与日本血吸虫可溶性虫卵抗原、成虫排泄分泌抗原和成虫抗原特
异性反应,而与大肠埃希菌、健康人血清和华支睾吸虫抗原均无明显交叉反应。HRP标记的单克隆抗体5G9检测14-33
蛋白的灵敏度为31.25ng/rlll。结论本研究获得了6株能稳定分泌抗13本血吸虫14-3-3蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞
株,为建立新的日本血吸虫活动性感染检测方法奠定了良好的基础。
[关键词】 日本血吸虫;14-3.3蛋白;单克隆抗体;制备;鉴定
【中图分类号】11383.24【文献标识码】A
andidentificationofmonoclonalantibodiesrecombinant
Preparation against
14-3-3ofSchistosoma
signalprotein japonicum
QianChun-yan,YuChuan—xin‘,sD粥Li-j城,YinXun·ren,Wang肛,XuyD增-妇增,HuaWan-qtm
InstituteParasitic ParasiticDiseasePreventionand
Jiangsu of Diseases,研Lalmratory011,Technologyfor Control,胧nistryof
Health,Wuxi214064,China
author
·Corresponding
To and monoetonalantibodiesrecombinant 14-3-3ofSchistosoma
[Abstract]Objectivegenerateanalyze against sigrIalprotein
Therecombinant14-3-3 obtained wasusedtoimmunizeBALB/e teeh-
japonicum.Methods protein previously mice.Hybridoma
Was to andscreenthe ceil couldsecretthe antibodies.The
niqueappliedprepare hybfidomalin
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