人脂肪干细胞分离培养鉴定及多向分化潜能的实验研究.pdfVIP

· 202 · CHINAJ0URNALOFEMERGENCYRESUSCITAT10NANDDISASTERMEDICINE March 2011，Vol6，No．3 · 论 著 ． 人脂肪干细胞分离培养鉴定及多向分化潜能的实验研究 沙德潜 陈伟 【摘要】目的 探讨在不同诱导条件下人脂肪干细胞(ADSC)的体外多向分化情况。方法 取人 脂肪组织，用酶消化法分离、培养ADSC，用免疫细胞化学法鉴定ADSC。体外培养并测定第二、五、七 代细胞增殖速率，绘制细胞生长曲线，计算群体倍增时间。流式细胞仪检测抗原CD44、CD49d、CD34． 分析酶消化法获得的细胞分别向表皮细胞 、成骨细胞、脂肪细胞定向诱导的能力，明确其分化能力。 结果 第二、五、七代细胞生长稳定，群体倍增时间约60h。10代以内的脂肪干细胞随着传代次数的 增加其增殖能力未现明显降低的趋势。免疫细胞化学显示，干细胞相关抗原CD44、CD49d为阳性 。 但与造血系统相关抗原CD34阴性。成表皮诱导组示 ：免疫组织化学鉴定结构显示有CK19的表 达。成骨诱导组示 ：细胞碱性磷酸酶染色阳性。成脂肪细胞诱导组示：油红O染色胞 质内脂滴均被 染成红色，证实为脂性液体。结论 脂肪干细胞体外增殖能力强，来源充足，细胞获得方便，又避免了 伦理问题且具有向其他多种细胞分化的潜能，可能成为理想的组织工程种子细胞。 【关键词】 脂肪干细胞；细胞培养；转分化 Isolation，culture，identification，and multi-directionaldifferentiation ofhuman adipose—deriVedstem cells：experimentinvitroSHADe—qia门，CHEN Wei．Departmentof Bum andPlasticSurgery,AffiliatedHospitalofMedicalCollegeofChinesePeople’sArmedPoliceForces， Tianjin300162，China Coresspondingauthor：SHADe—qian，Email：shadq2009@126．eom [Abstract] ObjectiveToexplorethepossibilityofinductionofhumanadiposederivedstemcells (ADSCs)intodifferentkindsofcellsunderdifferentkindsofconditions．MethodsHumanventraladipose tissueswereobtained byelectricvacuum aspirationtechniquefrom a30-year-old womanundergoing suction lipectomy．ADSCswere obtained by usingenzyme digestion and then cultured in vitro．The proliferationratesoftheADSCsofthesecond，fifth，andseventhgenerationsweremeasured，growthcurves weredrawn，andthepopulationdoublingtime(PDT)wascalculated．Cytometrywasusedtodetectthe expressionofthesurfaceantigensCD44，CD49d，andCD34．Differentculturefluidswereusedtoinduce theADSCstodifierentiateintoepidermoidceils，osteoblasts．andadiposecells．Immunohistochemistryand phasecontrastmicroscopywereusedtoobservetheeffectsofinduction．ResultsTheproliferativeactivity oftheADSCswasnotdeclinedobviouslywithinthe10passages．ThePDTwas60hr．Thestem cell—relat