鸡SGOL2基因的克隆测序与表达分析.pdfVIP

2013簿纂4争卷第7弱 Geneticsand Breeding·遗髓麓瀚 鸡SGOL2基因的克隆测序和表达分析 张振赫．李俊英，侯卓成+ (中国农业大学动物科技学院，北京100193) 摘 要：本研究通过对前期研究得到的候选鸟类卵巢特异表达基因LOC行克隆测序和表达分析， 检验该基因是否在成年母鸡卵巢高度特异表达并对其功能进行初步分析，为进一步揭示卵巢的生长发育和成 306 列，利用qRT—PCR方法对该基因进行表达分析。结果表明：LOCcDNA全长为1bp；比对序列分 析发现该基因是鸡SGOL2基因；系统进化树分析表明该基因与非洲爪蛙的遗传距离最近，符合基本的进化规 律。qPCR结果显示该基因在25周龄白来航母鸡的卵巢中过表达。本研究表明鸡JsG观2基因是卵巢组织的特异 表达基因。结合序列分析和表达分析，本研究推测该基因对母鸡的开产具有重要的作用。本研究还表明了实际 克隆测序全长eDNA对基因功能研究的重要性，即使在高质量的鸡基因组中，Ensembl预测基因仍然有很多缺 陷，从而导致以此为基础的一些生物学推断发生错误。 关键词：卵巢特异基因；SGOL2；RACE；qRT—PCR；鸡 中图分类号：S831．2 文献标识码：A 文章编号：0258—7033(2013)07—0005—06 卵巢的发育状况对母禽的繁殖性能特别是产蛋 1材料与方法 率的高低有着重要的影响。家禽卵巢的生长发育和 成熟及其独特的等级排卵是在一系列基因的精确调 1．1 实验动物本研究所使用实验动物来自同一 控下进行的，但具体调控过程有待进一步深入研究。 世代的商品代白来航蛋鸡，由中国农业大学家禽遗 有研究表明，与组织功能相关的基因在该组织中呈显 传资源与育种试验基地提供。 著性高表达[11。因此，对卵巢特异表达基因进行深入研 1．2组织样品采集和总RNA的分离12、16、20、 究可以找到未被发现的调控鸡繁殖性状的基因，为进 25、40周龄的白来航母鸡各3只，屠宰后分别取卵巢 一步揭示卵巢的生长发育和成熟机制奠定理论基础。 组织。55周龄的白来航母鸡3只，屠宰后分别取卵 巢、输卵管膨大部、输卵管峡部、输卵管子宫部、肝 SGOL2基因最早在人类中发现，所编码的 2蛋白质在有丝分裂和减数分裂过程 脏、回肠和胸肌。将采集的组织保存于一80℃超低温 Shugoshin—like 中起到重要作用【2】。该基因的敲除鼠家系中无论是雄 冰箱。用其中1只55周龄自来航母鸡的卵巢组织用于 鼠还是雌鼠均是不育的【31，表明该基因与动物繁殖性 目的基因克隆，所有组织用于目的基因的荧光定量 状有着重要的关系【4l。基于前期比较基因组以及转录 表达分析。总RNA提取用的是试剂盒E．z．N．A删Total RNA Bio—tek 组研究结果[5I，目前对候选的鸟类卵巢特异表达的基 Kit(OMEGAInc．，USA)，RNA反转录用 因LOC鸡上还未有相关报道。通过Blastl6] Life 的是试剂盒SuperScriptTMⅢRTKit(Invitrogen Bio 发现该基因的一段蛋白序列与哺乳动物的SGOL2基 Inc．)。