基于PCR的基因定量方法及方法学评价.pdfVIP

分子诊断与治疗杂志 2011年 3月 第 3卷 筇2期 JMolDiagnTher，March2011，V01．3N0．2 ．115． ·综 述 · 基于PCR的基因定量方法及方法学评价 樊飞 。 李丽 。。 【摘 要] 基 定量愉测已经成为研究遗传性疾病 、感染性疾病以及某些易感基冈引起的 病的重要 手段。存过去的儿年 1『I已相继Ⅲ现 』一 高效 “动的技术方法 日前可用的基 冈定星方法大致可以分成 3类：DNA 印迹技术 (Southern杂交 )，细胞遗传学方法和 以PCR扩增为 础的基 定量方法。水义对 基于PCR的基闪定量方法作一综述 ，许进行方7．去学评价。 【关键词 ] 基 定量 ；PCR；方法学 价 EvaluationofgenequantificationmethodsbasedonPCR FAN Fei．L1Li1 (1．DepartmentofLaboratoryMedicine，MedicalCollegeofSoutheastUniversity，Jiangsu，Yanjing210009， China；2．DepartmentofImmunologyLaboratory，ZhongdaHospital，SoutheastUniversity，Jiangsu，Nanjing 210009，China) ~BSTRACT】 Quantitativedetectionofgenehasbecomeanimportanttoolinstudyinghereditarydiseases， infectiousdiseasesanddiseasescausedbycertainsusceptibility genes．In thepastfew yearstherehavebeen successivelyanumberofefficientandautomatictechniques．Currently,availablegenequantificationmethodscan bedividedintothreecategories：DNAblot(Southernhybridization)，cytogeneticmethodsandgenequantification methodsbasedonPCR．Ourarticlepresentsareview mainlyongenequantificationmethodsbasedonPCR and evaluationofmethodology． [KEYWORDS】 Genequantification；PCR；Evaluationofmethodology 基 因定量是用来检测基因组中某一基因拷 贝数 传统PCR实验可以做到定量研究，但大多数是通过 的方法的总称 ，目前 已成为研究遗传性疾病 、感染性 测定反应产物的量来计算初始模板的量。实验 的成 疾病以及某些易感基因引起的疾病 的重要手段 。但 功受多方面因素的影响，例如模板的浓度和纯度， 是 由于生物界部分基因位点存在多态性的特点，某些 反应体系的设计 ，产物的竞争，反应循环数等等。 以 基因的缺失和重复可能处在杂合状态，而传统 PCR PCR为基础的基因定量方法有以下几种 。 和测序等方法只能检 出点突变和几个碱基的插入或 1 PCR与变性高效液相色谱技术 (multiplexPCR／ 缺失，因此探寻高效、可靠、灵敏 、实用的基 定量检 denaturinghighperformanceliquidchromatography， 测方法是当务之急。在过去的几年 中已相继出现了 MP／DHPLC 】 一 些高效 自动的技术方法。 日前可用的基因定量方 法大致分 3类 ：DNA