寒温祛风通络方干预下UUO大鼠肾间质α-SMA、vimentin蛋白表达研究.pdfVIP

全国中西医结合发展战略研讨会 第四部分书面交流 病小鼠体内，对不同组肾脏病变程度进行观察，并采用免疫组织化学染色和蛋白印迹方法， 在注射链脲佐菌素4～5天后，B组、C组、D组、E组小鼠出现了多饮、多食、多尿的表 现，组闻无明显差异，而A组无多饮、多食、多尿出现。在12周末，B组及C组小鼠血肌 酐、肾重，体重比值和24小时尿蛋白定量较A组升高(P0。01)，D组升高更明显(P0．01)， E组KW，BW和UP较B、C组下降(P0．01)。小鼠肾组织光镜观察显示：与A组相比， B组与C组的系膜细胞增生，基质增多，系膜区增宽，基底膜增厚，D组病理改变最严重， 组减轻(p0．01)；4周末上述各指标变化更为明显，组间比较有显著性差异(p0．01)：12 尿病小鼠中megsin和ERK5在肾组织表达增强。过表达megsin糖尿病小鼠肾脏组织中 ERK5MAPK、TGF—P和FN表达明显增强，提示megsin可能与上述因子发挥了协同效应， 促进小鼠肾组织损伤的发生与发展。通过megsinsiRNA质粒转染，megsin的表达受抑制 后，ERK5MAPK、TGF．B和FN的表达减少，肾功能受损和肾组织的病变减轻，提示抑制 megsin的表达可减轻糖尿病小鼠肾脏损害。 PU-379 蛋白表达研究 孙万森铁小玲李睿萍吴喜利王竹 西安交通大学IJ．学院第二附属医院中医科 710004 【摘要】目的：本研究建立肾间质纤维化的UUO模型，观察UUO病理过程中肾间质纤维 化相关蛋白a平滑肌肌动蛋白和波形蛋白的变化，探索不同药性祛风通络方对对肾间质纤维 化的防治机理。方法： 建立UUO肾间质纤维化动物模型，SD雄性成年大鼠80只，体重 其中UUO组又根据干预的不同随机分为7组，即模型组(B组，n=10)、温热大剂量组(C 全国中西医结合发展战略研讨会 第四部分书面交流 只分离暴露左侧输尿管，但不从中结扎和剪断。术后第一天开始灌胃，治疗各组灌服相应生 药浓度的中药浓缩水煎液，10m1．kg一1，约2ml，每日一次；假手术组及模型组灌胃等体积 蒸馏水。术后第21天将大鼠全部处死，取术侧肾脏组织，一半用作病理学染色，观察肾间 质纤维化程度，一半用于总RNA和蛋白提取，Real-timeRT-PCR和Westem blotting免疫 印迹法检测肾脏组织a—SMA、vimentinmRNA含量及蛋白表达情况。结果：1)UUO模型 后21天，模型组及治疗各组大鼠梗阻侧肾体积较对侧增大，剖面肾实质不同程度萎缩，肾 盂扩张呈囊状，模型组最为明显。2)Masson染色显示模型组近端肾小管上皮细胞萎缩， 集合管和远曲小管管腔明显扩张，周围大量炎性细胞浸润伴问质胶原成分显著增加、纤维组 织增生，肾小球有硬化或数目减少，干预各组上述病理情况均不同程度改善，其中温热小剂 量组改善最为明显。3)寒温祛风通络方干预下UUO大鼠肾组织a平滑肌肌动蛋白(a—SMA) 表达的变化与假手术组相比，UUO各组肾组织中a-SMAmRNA含量均明显升高(P0．05)， 以模型组升高最为显著(P0．01)；与模型组相比，治疗各组a—SMAmRNA含量均表现不 同程度下降(P0．05)，以温热小剂量组下降最为显著(P0．01)；温热大、小剂量组之间、 祛风大、小剂量组之间均表现显著性差异(P0．05)。余各组之间比较，差异均无统计学意 义。Western 的表达表现出与a—SMA同样的变化趋势。不同之处在于，各组内相比，除假手术组外，各 者之间无明显统计学差异(P0．05)。结论：1)UUO大鼠肾小管上皮细胞上温度感受通 道TRPV4表达较正常大鼠增多，可能与UUO过程中肾间质水肿，引起细胞微环境中的渗 透压、温度等的变化有关。 2)祛风通络方及寒温加味方可抑制肾组织a．SMA、Vimentin 的表达。