应用全自动免疫组化染色仪所遇相关问题探讨.pdfVIP

201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 K．ras基因突变以点突变为主，通常发生在N端12、13和6l密码子，其中又以12密 码子突变最常见。Brink等[6】用直接测序法研究了737例结直肠癌患者肿瘤组织中K．ras基 密码子和13密码子点突变占94％。国内高枫等【7】研究证实43．8％的结直肠癌组织中检测出 研究采用焦磷酸测序法对K．ras基因12和13密码子进行检测分析，结果发现67例结直肠 癌石蜡标本中26例发生K．ras基因突变，突变率为38．8％。其中，12密码子的突变率为32．8％ K．ras基因在结直肠癌中有如此高的突变率，更充分说明对计划使用西妥昔单抗治疗的结直 肠癌患者进行K．1as基因突变检测的必要性。进一步研究发现，26例K．ras基因突变可分为 尽管癌组织中常常混有其他非肿瘤细胞，我们仍然检测出12密码子(GGT—GCT)这种文 献报道中较罕见的突变类型。这更足以证明用焦磷酸测序法来检测结直肠癌中K．1aS基因12 和13密码子突变的可行性，且焦磷酸测序法相比双脱氧核苷酸链终止法具有更高的灵敏度， 标本中突变细胞的含量达到5～10％以上，即可有效检测。 K．啪基因突变的临床病理学意义，各家报道不--[8，9】。本研究中，26例女性结直肠 癌患者有15例发生K．ras基因突变，而4l例男性患者中只有1l例发生K．ras基因突变，两 者相比差异有统计学意义(P=0．012)，提示女性结直肠癌患者更易发生K-ras基因突变。转 移是预后不良的征兆，也是癌症患者死亡的主要原因[10】。本研究资料显示，有淋巴结转移 组K．ras基因突变率高于无转移组，差异有统计学意义(P=0．048)，提示预后不良患者的K．瑚 基因更容易发生突变，但需进一步扩大样本研究证实。K．ras基因突变与年龄、肿瘤位置、 高，结肠发生K．ras基因突变多于直肠(P=0．066)。另外，除性别有统计学差异，K-ras基因 12密码子突变(包括第l位碱基和第2位碱基突变)与其他临床病理指标无关(Po．05)。， 153．应用全自动免疫组化染色仪所遇相关问题的探讨 曹晓卉杨志慧李桂梅 南京中国人民解放军第81医院病理科 应用最为广泛，现在多数医院病理科用的是传统手工做法，存在较多的缺陷，全自动免疫组 化染色仪在一定程度上可以减少手工操作中主观因素带来的不利影响，便于质量控制，在免 疫组化技术中是一个新的飞跃，但是操作过程中发现表皮生长因子受体(EGFR)、增殖指数 抗原(Ki．67)在一抗试剂的选择及与手工操作相比较表达上有一定的差别。本文就遇到的 问题用不同的试剂及方法进行探讨，旨在进一步提高免疫组化检测的方便性与准确性。 一材料与方法 l材料及试剂 收集2011年6月份送检的肺腺癌及胃腺癌标本各10例。EGFR试剂分别购自北京中杉与康 克公司，全自动染色仪封闭套盒购自罗氏，手工操作中所需二抗及DAB显色系统试剂均购 自北京中杉金桥公司。 2方法 2．1对10例肺腺癌组织切片采用全自动免疫组化仪并选择两种EGFR一抗试剂，癌组织常 290 2011年全国病理技术新进展研讨台论文忙稿 规包埋切片，厚度为3um，65度烤片过夜。在全自动免疫组化仪中设置两种EGFR的一抗 试剂所需的程序z选择石蜡包埋组织应用程序，烤片，修复(一种选择酶消化法修复，另一 种选择不修复)，37C孵育一抗，苏木素复染，返蓝。然后把全自动染色仪二抗显色系统封 闭套盒及所需一抗放入试剂架中，玻片贴好标签开始运行，染色完成后，无水酒精系列脱水， 二甲苯透明，中性树胶封片，镜下观察． 2．2对10倒胃腺癌组织切片采用手工操作及全自动免疫组化仪两种方法进行尉-67检测。 手工操作的切片脱蜡至水．3％过氧化氢处理，高压修复抗原，自然冷却后．PBS冲洗，加 一抗试剂37℃孵育lh，PBS冲洗3次，二抗室温孵育20分钟．PB$冲洗3次，DAB显色， 无水酒精系列脱水，二甲苯透明，中性树腔封片。全自动仅操作的切片：设置程序(选择石 蜡包埋组织应用程序，烤片，EDTApH-一)0修复，37C孵育一抗．苏末素复染，返蓝。将 然后把全自动染色仪二抗显色系统封闭套盒及所需一抗放入试剂架中，标签贴置玻片上，开 始运行，染色完成