Rpf对环境中难培养与其VBNC菌群复苏作用研究.pdfVIP

专题一环境微生物学研究前沿 群多样性不同。有机物含量是影响钱塘江底泥样品中anal】：蚰ox菌种群分布的主要因素，卸aI】呦ox菌种 群多样性与有机物的含量成反比，而anammox菌的数量则与无机氮的含量呈正相关。椒江口潮间带沉积 物中觚a删Ⅲlox菌的种群多样性水平较低，以鼻锄明绷胁属的ana删∞ox菌为主，而潮下带沉积物中an硼删【ox 菌呈现了种群多样性，同时检测到了4个属的锄皿nox菌。潮间带沉积物中锄mmox菌的种群分布主 要受硝基苯和有机质含量的影响，潮下带主要受硝基苯含量、硝酸盐浓度和盐度的影响。潮间带沉积物 中柚a咖x菌的种群多样性水平与有机质含量呈负相关，潮下带沉积物中孤猢ox菌的种群多样性水 平和数量与硝基苯含量和盐度呈负相关，与硝酸盐浓度呈正相关。水稻土壤生态系统中，锄姗mox菌种 群多样性水平也较高，在O．5米深度的范围内，随着深度的增加，其种群多样性从5个属的锄a舢∞ox菌 降低为2个属的ana加mox菌。模拟土柱富集培养结果表明，经过18个月的富集，水稻土模拟土柱生态 系统中锄mmox活性明显增强，而不同土层a∞姗oX菌的种群组成随着富集时间的增加而呈现明显的 变化，种群也发生漂移，出现明显的生态位的分离。 Rpf对环境中难培养及其VBNC菌群复苏作用的研究 丁林贤1．。洪华嫦1。林红军1。横田明1’2 ’’浙江师范大学，地理与环境科学学院，金华32l0042日本东京大学，分子细胞生物学研究所，东京113枷32 摘要：【目的】利用复苏促进因子Rpf限e乳lsc妇donp舢oting觚锄’，观察环境中难培养以及活的 but 但非可培养Ⅵ≥NC似ablen∞cult啪ble)状态细菌的复苏作用，探索环境微生物多样性资源及其开发 应用的新途径。【方法】根据Mukamolova等报道的方法，从培养上清以及硝基因分子克隆与表达获取 藤黄微球菌^纯nDcDcc凇缸自睨岱(日本东京大学分子细胞生物学研究所L～M菌种保藏中心提供)的Rpf． 利用长期静置培养方法获得藤黄微球菌、，】卧屺菌体并验证Rpf的复苏能力；培养基中添加10％活性Rpf’ 利用MPN与平板分离方法筛选验证并获得土壤、污水处理系统中Vl≥NC菌群，计算取得Rpf对v】3NC 菌的复苏促进生长效果；系统学以及多相分类学方法对可培养化的v】3NC菌群的分析与鉴定。【结果】 1．藤黄微球菌经一年的长期静置培养，显微镜下观察菌体细胞数缓慢下降，但平板法观察可培养细胞数 快速下降，两者之差达4．5个对数数量级，菌体形态特征以及培养性状均有显著变化，绝大部分菌体进 入、，】BNC状态；2．培养上清以及彬基因成功克隆与表达并经纯化的Rpf，两者对藤黄微球菌的vBNC 菌体具有近loo倍的复苏促进生长能力；3．培养基中添加10％活性Rpf’能够检出传统方法难以分离到 壤样品中获得40株确认为源自Ⅵ≥NC的菌体，它们属于鼬。如cDcc淞、么，I咖m6口cf盯、鼢触咖D旭、 阳性菌群，16SrRNA相同性为96．100％，证明并提案分属于3个属的7个菌株为新种细菌。【讨论】 Mukamolova等发现Rpf以来，主要集中在医学流行病学以及免疫学等方面的研究，在针对土壤、污水处 理系统等环境中处于难培养以及Vl扑iC状态微生物的应用方面很少见有报道。本研究证实了MIlI【趣olo垤 等报道的藤黄微球菌能从培养上清以及分子克隆表达获得活性Rpf蛋白，对其自身VBNC菌体的复苏、 并且发现对土壤与污水处理系统中处于Ⅵ3NC状态菌群同样具有复苏促进生长的作用，获得了一组近缘 72