MS培养基凝固效果和高温灭菌的PH值变化的研究.pdfVIP

维普资讯 第 为卷第 3期 Joumal0fH瑚u北l~i大u学v学e瑁报时((自然曲r科丑l学sc版) ．23 No．3 2001年 9月 Sep．，2001 文章编号：1000—2375(2001)o3—028O一04 MS培养基凝固效果和高温灭菌后 pH值变化的研究 陈永勤 (瑚北大学生命科学学院，湖北 武汉43~062) 摘 要：研究了培养基的 值、琼脂浓度与h佑培养基凝固的关系，以及不同成分对高温灭菌后 h佑培养 基 值的影响．结果表明，调高培养基的pH值或增加琼脂浓度均可改善培养基的凝固效果；高温灭菌后，MS 基车培养基的pH值由灭菌前的5．80下降为5．51，造成pH值下降的最主要原因是高温灭菌过程中EDIA铁 盐与其它微量元素发生相互作用所致；同基车培养基相比，培养基中加入300g-L 蔗糖、食用白糖、葡萄糖 或果糖使高温灭菌后的培养基的pH值分别下降了0．06、0．10、0．28和0．98个单位，而舔加2．0gL·。。水解酷 蛋白、蛋白胨、酵母提取物或 1．0—5．0g-L 活性炭则使高沮灭菌后的培养基的 值分别上升了0．23，0．18， 039和 0．19～0．72个单位 ． 关键词：MS培养基； 值；琼脂；凝固效果；水解酪蛋白、蛋白胨、酵母提取物；活性炭 中圈分类号：o813．1 文精标识码：A 植物组织培养是在人工配制的培养基上无菌培养植物的幼苗、器官、组织、细胞或原生质体．在植物 组织培养过程 中，因为培养基成分和培养条件可人为控制，所以植物材料的生长发育过程比较容易调 节．现在无论是在植物的科学研究中还是在生产实践中，植物组织培养技术都得到了广泛的应用． 由于培养基的pH值对培养基中一些物质的溶解度、植物材料的生长和琼脂的凝固效果有重要影 响，因此在配制培养基时，准确调节培养基的pH值是很重要的．为此 ，张宪银等对用pH试纸测定培养 基pH值的方法进行了改进 ，从而提高了pH值测定的灵敏度 j．在实际操作过程中，培养基的pH值都 是在灭菌前调至预定值的．但高温灭菌后 ，培养基的 口H值会有所下降 ．这是造成高温灭菌后固体培 养基凝固不好、甚至不凝固的主要原因之一．虽然植物组织培养技术的研究和应用已有较长的时间，但 人们对高温灭菌造成培养基 DH值下降的原因报道甚少．Ball认为在高温灭菌时，培养基中蔗糖会水解 成果糖和葡萄糖，而葡萄糖进一步变成葡萄糖酸，从而导致了培养基pH值的下降 ；Druart和Wdf的试 验结果表明，活性炭的存在会加速高温灭菌过程中蔗糖的分解 ．本研究以植物组织培养中最常用的 Ms培养基为试验培养基，研究了培养基pH值和琼脂用量对培养基凝固效果的影响，以及大量元素、微 量元素、有机成分(维生素和氨基酸)、碳源、琼脂、有机附加物和活性炭等成分对高温灭菌培养基的pH 值变化的影响． 1 材料与方法 1．1 试验培养基 MS培养基 ． 1．2 琼脂浓度和培养基pH值与培养基凝固效果的关系 以进 口琼脂粉(日本)和金闽南牌琼脂条 (商 品名为卡拉胶，福建石狮琼脂副食品加工厂、闽南琼胶有限公司)为凝固剂．琼脂用量分别为5、6、7、8、 9、10、11和 12g·L ，培养基的pH值分别为4．5、5．0、5．5、6．0、6．5、7O、8．0和9．0．采用完全试验设计 (见表 1)． 收蒋 日期：20oo—ii一24 基金项 目：湖北省教育厅科研基盒(98Boo4) 作者简介：陈永勤(I961一 )，男，博士，副教授 维普资讯 第3期 胨永勤：^Is培养基凝固效果和高温灭菌后pH值变化的研究 1．3 不同成分对灭菌后培养基ptI值的影响 试验设计见表 2 表 1 璩脂浓度和培养基pI】值【对培养基曩圃效果舶影响 注：表中的字母为培养