狮头鹅α-干扰素基因的克隆与遗传分析.pdfVIP

维普资讯 中国畜牧兽 医 2008年第 35卷第 6期 生物技术 ·29 · 狮头鹅 一干扰素基因的克隆与遗传分析 郑晓灵 。卢曦 。刘艳芬 。陈绍红 。杨乐乐 。刘铀 (1．广东海洋大学农学院，湛江 524088；2．广东海洋大学生化 中心，湛江 524088) 摘要 ：从狮头鹅外周血细胞 中提取基因组 DNA，采用巢式 PCR方法扩增 a一干扰素基 因片段 (d-Go—IFN—a)；同时从新城疫 病毒(NDV)刺激培养外周血淋 巴细胞提取总 RNA，用 RT-PCR方法扩增 a一干扰素基 因片段 (m—Go-IFN—a)，将上述扩增片段 分别克隆到 pGEM-T载体并进行序列测定 。结果表 明，a一干扰素基 因全长均为 576bp，编码 192个氨基酸 ，比较 d-Go—IFN—a 和 m-Go-IFN— 的核苷酸序列，可见 155位核苷酸由A突变为 G，相应地 52位氨基酸 由M突变为 R，提示狮头鹅 一干扰素基 因存在单链核苷酸多态性 ；狮头鹅与其它家禽品种 a一干扰素基因的核苷酸序列 同源性介于 41．2 ～98．3 之间，其推导的氨 基酸序列同源性为 13．0V0～96．4 ，不同鹅品种的a一干扰素具有极为相似的二级结构。 关键词 ：狮头鹅 ；干扰素 ；克隆；序列分析 中图分类号：Q785 文献标识码 ：A 文章编号：1671—7236(2008)06—0029—05 干扰素 (interferon，IFN)是体 内重要 的免疫 扰素研究报道不多，秘晶玮等 (2005)从外周血白细 活性细胞因子，它最早是 由 Isaacs(1957)在研究鸡 胞克隆到东北 白鹅 a一干扰素基 因。 胚绒毛尿囊膜中禽流感病毒时发现的一种干扰病毒 狮头鹅是世界著名的大型水禽品种，也是南方养 繁殖的细胞 因子 ，但 与人类 、哺乳动物相 比，禽类干 殖范围较广的经济禽类，具有体型大、适应性强、产肉 扰素的研究明显滞后。Sekellick(1994)首次用 RT— 性能好、生长快、耐粗饲等优 良特性，其突出的抗病性 PCR方法克隆到鸡胚成纤维细胞 IFN—a基 因。随 能深受国内外学者的关注。本试验采用 PCR和 RT- 后 Digby(1995)也 成功 克隆 到鸡 IFN一-／基 因。 PCR方法分别从外周血细胞基因组 DNA及淋巴细 Schultz(1995)从基因组 DNA中克隆到鸭 IFN一7基 胞RNA中扩增狮头鹅 IFN-a基因，并对其核苷酸和 因。Xia(2004)、Wei(2006)分别从基 因组 DNA 中 氨基酸进行了初步分析，为进一步研究狮头鹅抗病特 克隆，原核表达丝羽乌骨鸡 、三黄 肉鸡 IFN—a基 因 性以及开发高效抗病毒制剂奠定基础。 及研究重组IFN—a的抗病毒效价 。目前有关鹅干 1 材料与方法 1．1 试验动物 120日龄临床健康 的雄性狮头鹅， 收稿 日期 ：2007—11—26 购于湛江某种鹅场 。 作者简介 ：郑晓灵 (1982一)，女 ，广 东人 ，硕 士生，研究方 向：动物 1．2 主要 试剂 RPMI一1640培养基 为 GIBC0／ 营养与免疫。 BRL产品，淋巴细胞分离液购 自上海生化试剂厂 ， 第二作者与第一作者具有 同等贡献 。 TrizolReagent购 自Invitrogen公司，MLV反转录 通讯作者 ：刘铀(1966一)，男 ，湖南人，副教授