ADAM22蛋白和1433β蛋白之间的相互作用.pdfVIP

( C 辑) 第32 卷 第3 期 SCIENCE IN CHINA ( Series C) 2002 年6 月 ADAM22 蛋白与14-3-3 蛋白之间的相互作用 * 朱鹏程 桑瑛颖 徐人尔 赵 李昌本 赵寿元** (复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室, 上海 200433) 摘要 ADAM 家族是一类具有去整合域和金属蛋白酶域的跨膜蛋白, 广泛参与各种 重要的生理过程, 如精卵结合 神经系统发育 成肌细胞融合以及炎症反应等. 该家 族蛋白具备潜在的粘连和蛋白酶活性. adam22 在脑部高度表达, 基因剔除小鼠则出现 严重的共济失调, 并在断奶前死亡, 但其作用机制不详. 用酵母双杂合系统筛选到与 ADAM22 相互作用的蛋白质 14-3-3 , 离体结合实验 免疫共沉淀进一步证实了 ADAM22 与 14-3-3 蛋白相互作用的专一性. ADAM22 胞内部分系列缺失实验表明, C 端第 864 ~ 892 氨基酸残基是 14-3-3 的结合基序. 14-3-3 在脑部大量表达, 具有介 导细胞的扩散 迁移及调节细胞周期等重要功能. 因此, 本实验证实这两种蛋白质之 间存在相互作用, 为阐明ADAM22 在神经系统发育中的功能奠定了基础. 关键词 ADAM22 14-3-3 酵母双杂合系统 免疫共沉淀 细胞粘连 ADAM(a disintegrin and metalloprotease domain)家族是近年来发现的一类锚定于细胞膜 上的细胞表面蛋白家族, 目前已经发现该家族有31 个成员. 典型的 ADAM 蛋白具有原蛋白 域 金属蛋白酶域 去整合素域 半胱氨酸富集域 类 EGF 域 跨膜域和胞内信号域[1~3]1). ADAM22 是潜在的细胞粘连分子, 它的基因在脑部广泛表达, 但在脊髓中少有表达, 该蛋白 [4] 金属蛋白酶域的锌指结构被破坏, 去整合素域不含 RGD(Arg-Gly-Asp)序列 . 目前已克隆了 adam22 基因, 分析了其组织表达谱并推测了潜在功能, 至于该基因的具体生理功能以及在信 号转导中的作用都还没有报道. 本研究运用酵母双杂合系统, 构建了 LexA 和 ADAM22 胞内 域的融合蛋白作为饵蛋白, 筛选人胎脑cDNA 文库, 分离出与ADAM22 相互作用的蛋白, 并 研究其有关功能. 1 材料与方法 1.1 酵母双杂合筛选与鉴定 PCR 扩增获得adam22 胞内部分的 cDNA 片段, 插入pEG202 质粒构建成符合读框的质 粒 pEG-ad22cyt , 这一质粒表达产生的 LexA 和 ADAM22 胞内域(ADAM22cyt) 的融合蛋白 LexA- ADAM22 cyt, 作为酵母双杂合体系的饵蛋白. 利用同样的方法将 adam29 和adam 10 胞 内部分cDNA 插入pEG202 质粒, 构建成相应的融合蛋白体质粒pEG-ad29cyt 和pEG-ad10cyt, 作为实验对照(表 1). 同时, 将编码adam22 胞质 C 端有缺失的肽段的 cDNA 插入pEG202 质 粒, 构建成系列缺失的 pEG