大豆遗传转化的研究.pdfVIP

◎学Aea术dem园icF地ield doi：10．3969／j．issn．1000-8071．2014．09．010 大豆遗传转化 的研究 杜 娟 (长春市农业学校 九台 130504) 大豆遗传转化的受体主要有未成熟子叶、胚性悬浮 2．1 农杆菌介导法在大豆遗传转化中的应用进展 培养物 (细胞团)、胚轴、子叶节和子房等。其中，大 首次用农杆菌介导法转化大豆并且获得转基因植 豆未成熟子叶和胚性悬浮培养物主要作为基因枪法的转 株的是Hinehee等于1988年完成的，并且以Kan作为筛选 化受体，由于它们的体积较小，作为基因枪轰击的靶较 标记 ，其中仅有6％为转基因植株。1999年 ，Zhang等以 为经济；大豆胚轴和子叶节可以作为农杆菌介导法的主 bar基因作为筛选标记 ，用除草剂进行筛选获得了转化 要转化受体；子房可作为花粉管通道法的转化受体。 的植株，但是转化率仍 比较低。2000年 ，Clemente等与 Hinehee等使用同样的方法 ，以草甘膦作为筛选剂，获得 1 基因枪法 了196个可育的转基因植株。2007年，刘尚前等以6个品 种大豆体细胞胚为受体，利用农杆菌介导法成功将Bt基 基因枪法又称生物弹法或微粒枪法、微粒轰击法， 因转人大豆中。到 目前为止，农杆菌介导法的大豆遗传 是依赖高速度的金属微粒将外源基因引入活细胞的一种 转化已被人们广泛应用 ，也取得了许多成效。 转化技术。 2．2 农杆菌介导法的优缺点 1．1 基因枪法在大豆遗传转化中的应用进展 2．2．1 优 点 MeCabe等首次用基因枪法转化大豆未成熟胚的生 ①转化率高；②所转基因为T—DNA左右边界之间的 长点，获得大豆转基因植株。1989年Christou等利用基 序列；③可转移较大的基因片段；④能够稳定遗传 ，多 因枪法转化大豆未成熟幼胚获得转基因植株。1994年 ， 数符合孟德尔遗传规律。 Maughan等用基因枪轰击 固体培养的胚性细胞团，并在 2．2．2 缺 点 固体培养基上筛选 ，将牛酪蛋白基因转入大豆，获大量 ①转基因植株的获得周期较长；②需要依靠一定的 可育转基因植株。2002年，王萍等用基因枪法将双价抗 筛选标记对转化植株进行筛选 ，存在安全隐患；③对于 虫基因Bt和CpTI转入固体培养的大豆胚性细胞团，获得 一 些对农杆菌侵染效果不敏感的作物很难实现转化。 GUS的高效率的表达。2007年 ，王晓春和王罡等用基因 枪法将Bt基因转入大豆。 3 花粉管通道法 1．2 基因枪法的优缺点 基因枪转化法的优点：①操作简便易行 ，可快速获 花粉管通道法是利用植物授粉后 ，所形成的天然花 得第一代种子；②无宿主限制；③靶受体类型广泛 ；④ 粉管通道 ，经珠心通道 ，将外源DNA携带进入胚囊中， 可控程度高；⑤可以转化双层膜结构的细胞器。 以达到遗传转化的 目的。 尽管基因枪转化法有许多优点 ，但是还是有许多弊 3．1 花粉管通道法在大豆遗传转化中的应用进展 端。由于基因枪的轰击有可能造成外源基因的断裂，并且 1974年 ，周光宇根据杂交现象提出DNA片段杂交假 轰击的随机性降低了转化效率；转化进入宿主细胞过程 说，并设计 了自花授粉后外源基因导人植物的技术即花 中，会发生高拷贝插入或重排等现象