龙眼钙依赖蛋白激酶(CDPKs)基因克隆表达的分析.pdfVIP

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2015-08-15 发布于安徽
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龙眼钙依赖蛋白激酶(CDPKs)基因克隆表达的分析.pdf

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园艺学报2011，38(增刊)：2506 http：／／嗍ahs．∽．m Sinica 26．com ActaHorticulturae E-mail：yuanyixuebao@1 龙眼钙依赖蛋白激酶表达分析陈虎1，何新华1’2’。，罗聪1，邓立宝1，胡颖1 (1广西大学农学院，南宁530004；2广西作物遗传改良生物技术重点实验室，南宁530007) 龙眼喜温忌冻，寒害和冻害常给其生产带来严重损失。钙离子被认为是植物细胞内重要的第二信使，在各种外部环境胁迫刺激下，Ca2+浓度会发生相应的变化并诱导下游基因表达和蛋白质磷酸化方式的改变，从而实现对环境胁迫的应答。其中，钙依赖蛋白激酶(CDPk)是钙离子信号传递途径中一类重要感受器，在调控自身对外界环境的适应性中发挥重要作用。本研究中以石硖龙眼为试材，从蛋白质和转录水平对CDPKs基因的功能进行研究，为深入探讨龙眼CDPKs基因功能及其与抗寒的关系奠定基础。选用盆栽一年生石硖龙眼嫁接苗为材料，分别在4℃下处理0(对照)、2、4、8、12、24、48 和72h，采集样品保存于一80℃冰箱备用。龙眼叶片双向凝胶电泳参考游向荣的方法。利用SDS 法提取总RNA，cDNA合成按说明书进行。根据罗聪等的方法扩增基因全长。利用相关软件对CDPKs 基因生物信息学进行分析。荧光定量PCR采用染料法，按照2。△△u法计算出基因相对表达水平。采用17cm 4～7)对龙眼叶片低温胁迫蛋白质进行IEF．SDS．PAGE分离，从质 IPG干胶条(pH 971 605 基因的全长cDNA，长度为lbp，包括1个lbp的开放阅读框，编码535个氨基酸序列。 kD；该基因不预测龙眼CDPKs基因所编码的氨基酸序列的等电点为7．68，蛋白质分子量为60．97 含信号肽，属于膜蛋白，亚细胞定位在细胞质、叶绿体和液泡中。其蛋白质功能结构域分析显示：化位点，3个N一肉豆蔻酰化位点，9个蛋白激酶C磷酸化位点，1个典型的丝氨酸／苏氨酸蛋白激因在根、茎、叶中都有表达，为组成型表达，并发现该基因在蛋白水平和转录水平表达结果相一致。 72h内低温胁迫下间隔采样的荧光定量分析结果显示，随着低温胁迫时间的延长，龙眼不同组织 CDPKs相对表达量都表现出下降趋势，并在低温胁迫24h达到最小值，之后出现小幅度的上升。荧光定量结果也进一步验证了CDPKs基因与响应冷胁迫之间的相关性。关键词：龙眼；低温胁迫；CDPKs；克隆；表达中图分类号：S667．2 文献标识码：A 文章编号：0513—353X(201I)S-2506-01 收穑日期：201l一0r7—25 学校优秀人才资助计划项目(桂教人201065) ’通信作者(E-maih ch∞hIlb嘶畸2∞8@163枷；1H：0771-3270184)