苦参碱结构修饰物M19抗肝纤维化作用及 机制的研究.pdfVIP

第十届全国抗炎免疫药理学学术会议论文集 苦参碱结构修饰物M19抗肝纤维化作用及其机制研究 张俊平、王绍展、张晴、 李婕、胡宏岗、龚玺、王婧 (第二军医大学药学院生化药学教研室， 研究目的：苦参碱是从中药苦豆子中分离提取的一种生物碱，体外可抑制肝星状细胞(HSC) 增殖并诱导HSC凋亡，对四氯化碳诱导的大鼠实验性肝纤维化有着很好的治疗效果。M19为苦 参碱结构修饰物。本研究考察苦参碱及苦参碱衍生物．19抗大鼠实验性肝纤维化作用及其机制。 方法和结果：． (1)苦参碱衍生物．19抗大鼠实验性肝纤维化作用的研究：SD大鼠经腹腔注射硫代乙酰胺 制的大鼠肝纤维化模型，HE、天狼猩红染色和Masson染色进行病理学检查。M19可以明显减轻 肝纤维化大鼠肝组织的病理学改变，抗肝纤维化的作用优于苦参碱。血清学检查发现，M19和苦 参碱显著纤维化大鼠升高的ALT水平(pO．01)，但对凝血功能无影响。免疫组织化学试验表明， (2)MTT实验研究M19能显著抑制肝星状细胞HSC．T6增殖； I，11-SMA，TIMP·2，VimentinmRNA水平； Collagen (4)报告基因法结果显示，苦参碱Immol／L及M19100umol／L对核转录因子．rB转录活性 74．41％。 (5)苦参碱和M19结合蛋白研究：以活性小分子苦参碱和M19为探针，采用直接垂钓细胞 内蛋白的方法研究它们的结合蛋白。即采用固相合成方法将苦参碱／M19连接到树脂或生物素上， 采用连续亲和层析法分离和甄别细胞裂解物中药物的结合蛋白；应用竞争结合实验验证药物的特 异性结合蛋白。该特异性结合蛋白经MALDI．TOF质谱鉴定为核糖体蛋白X(Ribosomal protein， RPX，代号)，并用免疫印迹实验进一步确证。 (6)核糖体蛋白X在肝纤维化中的作用研究：免疫组化表明，RPX在肝纤维化大鼠肝组织 表达量显著升高，而正常组几乎不表达。M19显著减少纤维化大鼠肝组织RPX的表达，提示M19 可能与RPX结合后促进RPX降解，发挥抗肝纤维化作用：激光共聚焦试验结果表明，原代肝细 刺激的肝细胞变形，抑制RPX膜转移。 结论：苦参碱结构修饰物M19具有显著的抗大鼠实验性肝纤维化作用，其机制与其抑制HSC 的活化和抑制肝细胞经上皮．间质转化(EMT)的作用有关。特异性结合蛋白RPX可能在苦参碱及 其衍生物的药理作用机制中起着关键作用。