双阴性选择法纯化培养人骨髓多能成体祖细胞.pdfVIP

现代消化及介入诊疗2005年第10卷增刊Modem 2005，V01．10，Suppl DigestionIntervention ．209． 双阴性选择法纯化培养人骨髓多能成体祖细胞 慕宁 高毅 唐力军 骨髓源干细胞具有多向分化潜能㈣．特别是具 采集临床健康志愿者髂骨内骨髓，按临床常规 有向肝脏干细胞、肝细胞及血管内皮细胞分化的潜 骨髓穿刺操作取得红骨髓5—20IIll。所获骨髓加 能141。由于其取材方便，可以来自患者自身，无排斥 PBS液轻匀．‘细胞悬液按2：l比例加入到淋巴分离 反应．具有重要的临床应用价值．因此成为当前肝组 液中一次密度梯度离心。所获单个核细胞以l×106 织‘丁程学中的一大热点。CatherineM．Verfaillie工作加入自行配制的MAPCs培养基中。接种于50llll培 组从骨髓中分离出多能成体祖细胞(multipotent养瓶内。贴壁细胞即为骨髓基质细胞191。(附：MAPCs cellsfrom adult bone 000 600 progenitor marrow，MAPCs)的培养基(1 IIll)配方：低糖DMEMml； MCDB-201400 可塑性越来越受到大家的关注闻。本实验用免疫磁 ml；胰岛素5 mg：转铁蛋白100 activatedcell 性分离(magnetic sorting，MACS)方法mg；牛血清白蛋白lg；地塞米松0．03925mg；硒仕 stemcells． 钠0．05 分选骨髓间充质干细胞(mesenchymal mg：抗坏血栓2一磷酸盐25．62mg：亚油酸 4．7 MSCs)亚群MAPCs，并在改进分选方法和细胞培养 mg：谷氨酰胺3．9 基的基础上。探讨MAPcs的分选效率及培养技术，10 ng／n[1l、FCS按5％浓度在使用中加入)。 试图为HBAL及肝细胞移植等找到新的种子细胞 2．MACS分选骨髓多能成体祖细胞 来源。 原代培养1周后将骨髓基质细胞用0．25％胰酶 消化。用标准Buffer重悬为单细胞悬液。将浓度调 材料与方法 整到l×106／ml。按CatherineM．Verfaillie等的方法 一、材料 15】，分别用CD45、GIy-A微型免疫磁珠，进行两次阴 骨髓取自健康成年志愿者。miniMACS(cm5 性选择得CD45一，Gly—A匐i胞。调整细胞浓度为(1— cellisolation cellisolation kit、Anti kit、GiycophorinA 5)×l／ml，连续培养。吸取部分样品，送流式细胞 FITC Microbeads)、MACS阴性选择柱AS购自德国仪检测。台盼蓝拒染试验计数MACS分选前后细胞 Biotec。胰蛋白酶、乙二胺四乙酸钙钠盐 Miltenyi 活力。 3．流式细