通肾络胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏蛋白激酶C通路及其细胞外基质成分的影响.pdfVIP

第十次全国中医糖尿病大会·论文精选集 通肾络胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏蛋白激酶C通路及细胞外基 质成分的影响 吴以岭1，魏聪1，贾振华1，袁国强1，高怀林1，吴相春1 1河北以岭医药研究院(050035) 【摘要】目的：观察中药通肾络胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾脏葡萄糖转运蛋白一1(GLUT一1)、 蛋白激酶C(PKC)、细胞外基质(EcM)表达的影响，探讨通肾络胶囊对DN大鼠。肾脏保护作用的 可能机制。方法：采用单侧肾脏切除并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法复制DN大鼠模型，随 机分为假手术组、模型组、缬沙坦组、糖适平组、通肾络胶囊组。动态检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、 24h尿微量白蛋白(24h mALB)，末次给药后测定大鼠血浆糖化血红蛋白(HblAc)、透射电镜观察 各组大鼠肾脏超微结构改变，应用流式细胞仪技术测定各组大鼠肾脏组织GLUT-I的表达，应用免 疫组化技术及图像采集分析系统测定各组大鼠肾脏组织中PKC、Ⅳ型胶原(IV_C)、纤维连接蛋白 mALB(尸 (FN)、层粘连蛋白(LN)的表达。结果：通肾络胶囊可降低DN大鼠FBG、HbiAc、24h 保护作用。 【关键词】糖尿病肾病；通肾络胶囊；葡萄糖转运蛋白一l；蛋白激酶c；细胞外基质成分 糖尿病(DM)所致的各种并发症(心、肾、周围神经和视网膜病变等)是目前糖尿病患者致 死和致残的主要原因，糖尿病肾病(DN)作为DM常见的并发症之一，其特征性的病理改变是细 胞外基质在肾小管、肾小球的积聚导致肾小球和肾小管的硬化，发病机制涉及高糖引发的蛋白的 非酶糖化、多元醇通路和蛋白激酶C(PKC)通路激活及细胞因子、氧化应激等多种途径。其中 PKC通路可能是高糖引起各种紊乱的共同通路。基于目前研究现状，本文从PKC通路及细胞外基 质成分方面就通肾络胶囊对DN的保护机制进行初步探讨。 l材料与方法 2007年·厦门 第十次全国中医糖尿病大会·论文精选集 1．1糖尿病肾病大鼠模型的建立 成年雄性SD大鼠50只，体重250—3009，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物 正常饮食并适应环境1周后开始实验。大鼠麻醉行左侧肾脏切除术，术后恢复2周。将STZ溶于 作为DN大鼠成模标准。 1．2分组及给药方法 岭医药研究院提供)。选取10只正常大鼠作为假手术组，仅切开大鼠皮层、肌层，不切除肾脏， 随后缝合处理，每日同体积0．5％CMC—Na灌胃。各组连续灌胃给药8周。 1．3空腹血糖(FBG)测定 分别于造模前、注射STZ72h后、给药4、8周末，禁食12h后，尾静脉取血，血糖仪(美国 强生公司)测定空腹血糖。 1．4糖化血红蛋白(HblAc)测定 细胞，用生理盐水反复洗涤2-3次，取压积红细胞lmi加冷蒸馏水1．5ml，用旋涡混匀器充分混 匀，制成溶血液，严格按照试剂盒(南京建成生物公司)说明书要求进行检测。 1．5 24h尿微量白蛋白(mALB)测定 释若干倍后，应用大鼠尿微量白蛋白放射性免疫分析试剂盒(北京市福瑞生物工程公司)检测。 1．6透射电镜观察 于末次给药后，摘取右肾，取一小块肾皮质迅速浸入电镜液中，修成l×1×Imm3大小组织块， 置电镜液中4℃保存。采用日立H-7500型透射电镜放大20000倍进行镜下观察。 1．7。肾脏组织GLUT一1表达的测定： 于末次给药后，摘取右肾，取一块肾皮质固定于70％酒精中，应用流式细胞检测方法进行测 定。 2007年·厦门 第十次全国中医糖尿病大会·论文精选集 1．8肾脏组织PKC及细胞外基质成分Ⅳ_C、FN、LN表达的测定： 采用免疫组化的方法，并使用图像采集系统测定每个肾小球中着色的阳性物质光密度值，每 张切片随机选取五个视野，每组分析10个标本。 1．9统计学处理 所有数据运用SPSSl2．0统计软件进行统计分析，结果以均数±标准差(i±s)表示，采用 One-WayANOVA统计方法，组间差别的两两比较使用q检验。PO．05具