西农萨能羊脂肪分化相关蛋白基因(ADRP)cDNA的克隆与组织表达分析.pdfVIP

·416· 第五部分 牛羊遗传育种 西农萨能羊脂肪分化相关蛋白 基 的克隆和组织表达分析 赵旺生，罗军。，郝娟，孙雨婷 (西北农林科技大学动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌712100) 引畜 ADRP最初是通过差别杂交筛选技术，从小鼠脂肪细胞的cDNA文库中分离而来，其mRNA在脂肪细胞分化 的第l天即增加50一100倍，所以ADRP不仅是形成细胞内脂滴的主要成分，也是脂肪细胞内脂质沉积的重要标 志之一。ADRP是脂肪细胞早期分化的标志，它与胞浆脂肪滴沉积和转运有关。并参与形成脂肪贮存囊泡及控制甘 油三酯的利用。同时ADfuP是脂肪细胞特有的脂肪酸结合蛋白，可促进长链游离脂肪酸的转运，并可能有脂肪酸 受体蛋白的功能，因此在动物产品品质研究方面有广阔的应用前景。本研究采用Rrr-PCR技术克隆了西农萨能奶 提供参考。 材料与方法 采用％赫法提取西农萨能奶山羊乳腺组织总RNA，然后将检测合格的RNA反转录成eDNA作模板，通过对 Premier 5．0和Oligo 纯化的PCR产物与pGM-T载体进行连接，转化TOPIO，挑取单克隆并提取质粒，琼脂糖凝胶电泳检测后进行酶切 Green 因序列设计特异性实时荧光定量引物，以GAPDH为参照基因，SYBRI为荧光染料，通过RT-qPCR检测 ADRP基因在皮下脂肪、乳腺等12个组织中的表达变化水平。采用2一△△Ct法进行相对定量分析。 结果 005817) 96％。通过对吣PCR检测结果进行数据分析，发现奶山羊ADRP基因在皮下脂肪、乳腺、心脏、肝脏、肺脏、脾脏、 肾脏、瘤胃、小肠、卵巢、肌肉及垂体等12个组织中均有表达。通过2一△△Ct法计算发现ADfuP基因在乳腺组织中 的表达量最高，脾脏次之，在胸部肌肉和心脏中的表达量最低。 讨论 本研究克隆了山羊ADRP基因的eDNA区序列，该基因在各物种间相似性较高。A珊P基因广泛表达于肝脏、 胰岛、骨胳肌、肾脏、肺、小肠等组织，以及不同类型的细胞中，但其分布也存在种属差异。研究者先后从大鼠、小鼠、 转染的C0s-7细胞对长链脂肪酸如棕榈酸盐和花生四烯酸的摄取量明显增加，且呈时间和剂量依赖性，但对中等 长度的脂肪酸如辛酸或葡萄糖的摄取量没有影响。ADRP基因在所检测的皮下脂肪、乳腺等12个组织中有表达．但 表达水平不同，在乳腺组织中表达水平最高，与其他物种研究结果一致。其在乳腺组织中的高表达暗示了该基因有 可能在乳腺中具有很重要的功能。 关键词：西农萨能羊；A腺P；克隆；组织表达 致谢：本研究受转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08∞9-162B)资助完成。 ·通讯作者，E—m珂：lu巧彻@酮咖a￡edll．∞。