西农萨能羊脂肪酸代谢相关miRNA的筛选和miR-103-1的克隆验证.pdfVIP

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2015-08-22 发布于安徽
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西农萨能羊脂肪酸代谢相关miRNA的筛选和miR-103-1的克隆验证.pdf

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第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集西农萨能羊脂肪酸代谢相关miRNA的筛选与miR．103—1的克隆验证林先滋，罗军’，赵旺生，王伟奶山羊研究室陕西省农业分子生物学重点实验室，西北农林科技大学，杨凌712100 关键词：西农萨能羊；脂肪酸代谢；miRNA筛选；miR．103．1 引言 RNA，能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对从而引起靶mRNA降解或者抑制其翻译(动物上作用方式主和个体发育中的作用等方面，而关于其调控脂肪酸代谢的报道并不多，特别是关于调控山羊乳中脂肪酸代谢 miRNA的筛选、克隆及功能研究尚无报道。此外，由于山羊基因组序列尚未公布，从而影响了一些相关miRNA 的克隆，因此本试验利用miR一103．1内含子miRNA的特性进行了克隆验证。材料方法并通过AdEasy系统构建pre．miR一103．1腺病毒表达载体。结果 (1)miRNA的筛选：从数据库预测的结果中筛选出至少是2个数据库预测～致的miRNA10条、一致的 (泛酸酯酶)第5内含子近5 Pre．miR．103．1长78 bp，与相关报道一致。此外，山羊pre—miR．103．1与牛同源性为100％。 AdEasy—l质粒于大肠杆菌内进行同源重组。随后挑取一皿内的全部23个菌落，质粒提取后经酶切鉴定阳性率达100％。成功构建pre—miR．103．1腺病毒表达载体。讨论因最多且几乎全部参与脂肪酸代谢。同时，miR．103．1作为内含子miRNA，所在的基因组位置在进化上较保同、功能相关。因此在下一步的试验将进行pre．miR．103—1腺病毒的包装等工作，并在萨能奶山羊乳腺上皮细胞中探讨miR一103．1对细胞生长、脂肪酸含量及脂肪酸代谢相关基因表达的影响。一344—