养阴化瘀剔络方对血管内皮细胞的增殖及其损伤保护作用的研究.pdfVIP

‘中国老年保健医学杂志2007年第5卷第4期 ·药物与临床· 养阴化瘀剔络方对血管内皮细胞的增殖及损伤保护作用研究 郭宏敏1郑开明1陈文星2 作者单位：1江苏省中医院老年医学科2100292南京中医药大学中医药研究院210029 【摘要】 目的 保护作用。方法 胞培养液中过氧化物丙二醛(MDA)含量。结果养阴化瘀方对正常HUVEC细胞增殖作用无明显影响，对H20：诱导的内皮细胞 养阴化瘀剔络方对于 损伤有明显抑制作用，对上清中H202诱导的HUVEC细胞损伤产生的MDA含量有一定降低作用。结论 H20：诱导的HUVEC细胞损伤有明显的保护作用，对正常HUVEC增殖无影响。 【关键词】 养阴化瘀剔络方HUVEC增殖内皮细胞损伤 养阴化瘀剔络方是在中医理论的指导下，江苏省中医院 devices公司) 老年医学科在长期临床实践中摸索出的治疗老年血管病变 2实验方法 有效的中药方剂。我们认为老年血管病变机理为脏骑功能衰 2．1内皮细胞培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)， 退，气化失常，形成继发性的病理产物，脂化为浊，血化为瘀， 培养于RPMll640培养液中，其中含小牛血清10％，青霉素 贯穿于疾病始终，病理关键为阴虚、血瘀。养阴化瘀剔络法就 是基于这一病机认识，特别是“久病人络”、“干血”的病理特 2．2养阴化瘀剔络方对HUⅦC增殖的影响捌将2×104 性而创立的，化瘀剔络之品与养阴药相伍，祛邪而不伤正。切 个／孔LHUVEC接种96孔板。在上述条件下培养24h，加入养阴 合老年血管病变高龄虚损成瘀，且以阴虚血瘀为主的病机特 点，治疗老年血管病变疗效良好．已在以往的临床研究及实 20¨l体积者均以空白血清补足20山)，每个浓度行4复孔，继续 践中得到证实【l】．值得深入研究。本文进一步从实验研究论证 培养24h，然后每孔加20肛lMTT(5虮)。37℃孵育4h，倾去上 养阴化瘀剔络方从内皮细胞的影响力面治疗老年血管病变 清液．每孔加二甲基亚砜150m，振荡数分钟，使紫色结晶甲 的基础作用机制，阐明二者之间的相关性，为临床应用提供 理论依据。 吸光值(A值)。 l试剂和仪器 2．3养阴化瘀剔络方对Hn诱导m，vEC损伤的影响跚 1．1药品及试剂 养阴化瘀剔络方：药物组成为虎杖159、生地109、构杞子和养阴化瘀方(试验组同2．2)组，刺激细胞4h，每孔加入20斗l MTr(5叫／m1)，37℃孵育4h，倾去上清液，每孔加二甲基皿砜 159、制黄精209、地龙159、丹参159、川芎129、制酋乌129、葛根 150¨l，振荡数分钟，使紫色结晶甲媵充分溶解，在190全自动 159、水蛭59。先加水浸泡，再加三倍量水煎煮。沸后30min，收 集滤液，再加水煎煮，反复三次，合并滤液，浓缩得浸膏(1：5)， 酶标仪上于570啪处测定吸光值(A值)。 4℃保存备用。临用前湿热灭菌法除菌。 水平的影响 含药血清制备：上述浸膏进行大鼠灌胃(109浸膏／kg)。 每天2次，连续3天，最后一次灌胃后1h采血，3000Ipm／lOminH202加入空白组和养阴化瘀方(试验组同2．2)组，刺激细胞 离心，取上层血清，以20um一次性无菌滤器过滤除菌，分装 4h，每孔加入20pl 4℃保存。对照血清同法制备。 上清液，按试剂盒说明书操作测定MDA的水平。 2．5统计方法所有数据均以牙拯表示，以t检验进行显 RPMl21640培养基、胰蛋白酶为Gibco公司产品，新生小 牛血清为杭州四季青生物工程材料研究所产品，四氮唑兰