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一种能同时检测SEA和SEB单克隆抗体的制备及其特性分析 梁斌万君花陈福生王小红 (华中农业大学食品科技学院武汉430070) 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是一种重要的人畜共患致病菌， enterotoxins，SE) 广泛存在于自然界中，其产生的肠毒素(Staphylococcal la SE时即能引 可通过污染食物而导致食物中毒。据报道，每lOOg食物中含18g 起金黄色葡萄球菌食物中毒。目前，随着人们对食品安全重视度的加深，国际上 已将肠毒素的检测列入食品检验法规，因此建立灵敏、快速的肠毒素检测方法， 是食品安全检测的一项重要研究内容。 目前，肠毒素的检测方法主要有动物学试验、免疫学方法、分子生物学方法、 生物传感器技术和超抗原技术。在这些方法中，免疫学方法因其具有简便、快速、 灵敏、特异性高等特点，是检测肠毒素广泛采用的一项技术。单克隆抗体 (monoclonal anibody，McAb)纯度高，特异性强，一经研制出，便可大批量生 产，将其用于肠毒素的免疫学检测将大大提高检测的特异性和灵敏度。商品化肠 毒素ELISA检测试剂盒中采用的单克隆抗体主要是通过细胞融合技术，对实验动 物单独免疫一种抗原所产生的单抗，一次实验只能检测一种肠毒素。已知肠毒素 种类多达20种，葡萄球菌食物中毒往往也不是由单一毒素引起的，在实际检测 过程中，有时不需要对肠毒素血清型作出鉴定，只要判断有没有肠毒素存在即可， 因此如果一次反应能同时检测多种肠毒素将大大减少葡萄球菌食物中毒分析的 工作量。为此，采用混合免疫法，筛选制备能同时针对多种肠毒素抗原的共同决 定簇的单克隆抗体，有可能实现一次反应检测多种肠毒素。 本课题以引起葡萄球菌食物中毒比较常见的金黄色葡萄球菌A型和B型肠毒 enterotoxin enterotoxin B， 素(staphylococcalA，SEA和staphylococcal SEB)作为免疫原，采用混合免疫BALB／c小鼠的方法，运用杂交瘤技术制备得到 同时针对SEA和SEB的单克隆抗体；同时以SEA单独免疫BALB／c小鼠为对照， 经同样的方法，制备得到相应的抗SEA单克隆抗体。对两种免疫方法制备的单克 隆抗体的性质进行了一系列的分析和比较，并采用间接竞争ELISA对混合免疫制 备的单抗在金黄色葡萄球菌肠毒素污染的乳制品中肠毒素的检测进行了初步的 应用评价。结果表明，混合免疫得到的杂交瘤细胞3F2所产腹水抗体针对SEA 107L／tool；针 的效价为4×i05，灵敏度为133．2ng／nd_．，亲和力常数为8．18X 对SEB的效价为i×i05，灵敏度为82．5 L／mol， ng／mL，亲和力常数为5．32×107 x 疫得到的杂交瘤细胞3C12所产腹水抗体针对SEA的效价为2i05，灵敏度为 115．9 BSA、OVA等均无交叉反应，与SEB仅有很微弱的交叉反应。这说明混合免疫得 到的3F2产生的单抗对SEA和SEB都有较好的效价、灵敏度、特异性和亲和力， 与单独免疫得到的3C12产生的单抗相比，在对同一种抗原(SEA)的性质上没有 明显差异。这些都说明：通过混合免疫方法有可能制备得到和传统免疫方法一样 性质的单克隆抗体，并且能够识别不同肠毒素的共同抗原决定簇。因此，可将这 种单克隆抗体尝试用于食品中多种肠毒素的同时检测。 作者及其通讯地址： 梁斌，男，硕士研究生， E-maii：—Ibsmiie99—9@163,com 万君花，女，硕士研究生， E-rail：awanjunhua@163,com 陈福生。男，