鸡β2-微球蛋白在马立克氏病毒感染的不同细胞中的基因表达水平.pdfVIP

第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛论文集 is that Callbeusedasan furtherdeteriorationmarkerinthe earlyphase．Itlikelychl32M important early MDV infection-phase． words：Chicken level Key 132-microglobulin，MDV,geneexpression l类分子的天然构型的稳 织相容性抗原的轻链与MHCl非共价结合于有核细胞膜上，对维持MHC l类分子呈递内源性肽过程中也发挥着重要作用 定及其正确折叠起关键作用。同时，]32M在MHC D-2I。因为MHC I类分子抗原的表 合从而诱导细胞免疫反应的发生。不仪如此，人们已经发现某些肿瘤细胞l-．MHC 达，．只．肿瘤细胞表面D2．M分子的下调或缺失常与肿瘸发展的进程相关。大量研究同样证实在某些 病理条件下血液和尿液中p2M的浓度会改变，这．--f以作为疾病临床检测的一个重要指树孓”。然而， 在MDV致病过程中132M的生物学功能至今仍不十分清楚。 在非哺乳脊椎动物中，以鸡为模型研究其免疫反应，抗病性和疫苗反应性可为人类疾病控制与 disease 免疫调节奠定良好的基础。马立克氏病(Marek’Sdisease，MV)是由马立克氏病病毒(Marek’S virus，MDV)引起的一种鸡的高度接触、传染性的恶性淋巴肿瘤性疾病，也是目前唯一能够以疫苗 控制的致肿瘤性疾病1641。对MDV致病机制的深入研究，不仅可以作为人类了解病毒致肿瘤机制的 中的作用仍未见详细报道。因此，本研究应用荧光定量PCR技术对chp2M在MDV感染不同细胞中 基因表达水平进行检测，以初步探索chp2M是否可作为MDV致肿瘤过程中新靶位的可能性。 1材料和方法 1．1细胞、病毒及实验动物 SPF种蛋由北京梅里亚公司提供，本实验室孵化至9-11 d，按常规方法【9】制备鸡胚成纤维细胞 (chicken embryo 毒株RBlB株。，强毒株GA株由本实验室保存；马立克氏病毒感染的T淋巴细胞系MDCC．MSBI由本 室保存：SPF种蛋，在严格控制外界污染的环境下孵化至出壳，转移-至．．SPF隔离器中饲养。 1．2主要仪器与试剂 ABI 7500Real．Time mL PRISM PCRstem为美国AB!公司产品；0．2PCR平盖薄壁管购自 Sy PremixEx RT ABI公司；T0talRNA提取试剂盒为杭州AXYGEN产品；SYBR Taq兀、PrimeScript Kit和EASY reagent ．溴．2‘．脱氧尿苷(BudR)购自Sigma公司：DMEM培养液和胎牛血清均购自GIBCO公司． 1．3引物设计与合成 No．M84767)和GAPDH(GenBankNo．K01458) 根据GenBank上已登录的鸡陀-m(GenBank 内参基因mRNA序列，用引物设计软件Primer5．0设计出特异性的引物，遵循引物设计的原则，引 物与引物之间避免形成稳定的j：聚体或发夹结构，扩增长度不能太人，避免错配。引物由大连宝生物 286 g--g,全国禽