高效液相色谱法测定虫草黄酒中虫草素的研究.pdfVIP

第 25卷第 4期 徐 州 工 程 学 院 学 报 (自然 科 学 版 ) 2O10年 12月 VO1．25No．4 JournalofXuzhou InstituteofTechnology (NaturalSciencesEdition) DEC．2O1O 高效液相色谱法测定虫草黄酒中虫草素的研究 孙 然 ，冷云伟 ，胡奇杰。，戚 民 ，叶 翔 (1．中国矿业大学 化工学院 ，江苏 徐 州 221116；2．湖州市质量监督检验所 ，浙江 湖 州 313000) 摘 要：采用高效液相色谱法建立 了虫草黄酒中虫草素含量的测定方法，探讨 了虫草素提取条 件 ，分析 了流动相组成、柱 温、波长对检测结果 的影响．研究表 明：色谱柱为 WatersSymmetryC 柱 ，流动相为 甲醇 ：水一15：85，流速为 1mL／min；检测波长为 288nm，柱温为 4O℃时分离、检测 效果最好；方法检 出限为0．05ng．该测定方法在黄酒质量控制方面具有应用价值． 关键词：高效液相色谱法；虫草素；测定 中图分类号 ：0652．63 文献标志码 ：A 文章编号 ：1674—358X(2010)04—0077—04 冬虫夏草是真菌类的名贵药材 ，产于中国．虫草黄酒是 以冬虫夏草为原料 ，以黄酒为浸剂配 以适 当添加 剂经深加工精制而成的Ⅲ，具有防癌、补气血 、延年益寿等功效 ，对气管炎 、关节炎、风湿病、糖尿病等有辅助 治疗作用． 虫草素 (3一脱氧腺苷)是虫草黄酒中的重要活性成分，为含氮配糖体的核酸衍生物，是嘌呤类生物碱 ，属于 核苷类抗生素．在 45种枯草杆菌中虫草素对 43种有抑制作用，也有抗病毒和抗肿瘤作用_2]．虫草素的含量是 评价虫草酒质量的一个重要的指标．目前 ，关于虫草黄酒中虫草素含量测定方法的报道较少．本实验采用高效 液相色谱法 (HPLC)测定虫草黄酒中虫草素的含量 ，为控制虫草黄酒的质量提供了简便、可靠的方法． 1 材料与方法 1．1 实验仪器与试剂 安捷伦 1200一G1321A高效液相色谱仪；SPD-紫外一可见光光度检测器 ；R一201旋转蒸发器 (上海 申胜生 物技术有限公司)；SHZ—D(IlI)循环水式真空泵 (巩义市予华仪器有限责任公司)；W201B恒温水浴锅 (上海 申胜生物技术有限公司)． 甲醇为色谱纯 ；水为超纯水 ；虫草素标准品(Sigma公司)，纯度大于 99 ． 虫草酒样品由湖州乾 昌酒厂提供． 1．2 样品处理 取适量待测虫草酒样 品，用 0．45ffm微孔滤膜过滤，备用． 1．3 色谱条件 色谱柱为 WatersSymmetryC18柱 (150mm ×4．6mlTli．d．，5 m)；流动相为 甲醇、水 ，流速 1mL／ min；检测波长 288nm；柱温 4O℃ ；进样量 10 L． 2 结果与分析 2．1 色谱条件的选择 2．1．1 流动相的确定 实验采用 甲醇、水为流动相，通过调整 比例，由图1～3看出：当甲醇 ：水分别为 3O：70，5O：5O时，出峰 时问相对较早 ，分别为 2．488，1．84min，不利于分离；当甲醇 ：水一15：85时 ，出峰时间相对 比较适宜，并且 保留时问较短 ，分离效果较好 ；因此 ，从总体上说 ，选择 甲醇 ：水一15：85作为流动相 ，效果 比较好． 收稿 日期 ：2010—1O11 基金项 目：浙江省质量监督局计划项 目 作者简介：孙 然 (1986一)，女，安徽宿州人 ，硕士研 究生，主要从事发酵工程研究 · 77 · 徐州工程学院学报 (自然科学版) 2010年第 4期 图1 流动相为 甲醇 ：水一30：70的色谱 图 图2 流动相为 甲醇 ：水一5