蛇足石杉内生真菌的分离鉴定及其抑菌活性.pdfVIP

科技信息 高校理科研究 蛇足石材内生真菌的分离鉴定及其抑菌活性 宿迁高等师范学校 李景辉 裴阿慧 [摘 要]目的：从蛇足石杉q-寻找具有药用价值的内生真菌。方法：采用PDA培养基进行蛇足石杉内生真菌的分离、尖端茵丝挑取 法纯化分离得到的内生真菌，然后从形态学上对分离得到的内生真菌进行初步鉴定，最后采用杯碟法对所分离到的部分菌株进行抗 病原性细菌实验，并对其进行生物活性研究。结果：从蛇足石杉中分离到的内生真菌，经初步坚定结果表明，分属于7个属。结论：部分 内生真菌菌株对病原性细菌有不同程度的抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用明显。 [关键词]蛇足石杉 内生真菌 分离鉴定 押菌活性 引言 后，每个平板放人两个牛津杯，在每个杯中分别加入一种上述已调好 蛇足石杉 Huperziaserrata Thunb Trev 又名救命王 、金不换等，属 pH值的发酵过滤液 200p~L，同时做上述 LB培养液空白对照试验，37℃ 蕨类石杉科 Huperiaeeae 石杉属 HuperziaBemh 植物。全草有毒，民间 培养 24h，观察结果 ，并用游标卡尺测量抑菌圈直径。试验重复 3次，以 常将全草用于治疗跌打损伤 、瘀血肿痛、精神分裂等疾病。 抑菌圈直径的平均值为试验结果。 蛇足石杉所含的药用物质石杉碱 甲 huperzineA，HupA 在治疗阿 2．结果与分析 尔茨海默病 Alzheimer’sdisease，AD 方面的疗效显著。近年研究还证实 2．1蛇足石杉 内生真菌的分离纯化结果 HuPA有神经保护和改善老年性记忆功能衰退的潜力 ，引起世界各国 蛇足石杉 中经分离纯化得到 内生真菌 33株，经过表面消毒之后 ， 药学工作者广泛关注和研究。但 由于蛇足石杉 中有效成份含量极少，而 在未做切割处理的蛇足石杉材料上没有真菌的生长。这说明33株真菌 且蛇足石杉生长缓慢，再加上中草药的使用受到季节气候 ，地理环境等 均来 自于蛇足石杉的内部 ，即为蛇足石杉的内生真菌。 因素的影响，从而在一定程度上限制了蛇足石杉药用价值的发挥。因此 2．2蛇足石杉 内生真菌的形态学鉴定 从蛇足石杉中寻找能够产生与蛇足石杉相同或相似药用活性成分的内 通过菌落形态观察 ，发现 33株内生真菌生长情况有较大差异 表 生真菌有着重要的意义。本次实验主要对蛇足石杉内生真菌分离，纯化 1 。蛇足石杉茎部的内生真菌普遍生长较快，根和叶中内生真菌生长相 和形态学进行了初步鉴定，以期为从蛇足石杉中寻找有药用价值的内 对较慢 。 生真菌提供一定的参考。 表 1恒温培养 7d后部分蛇足石杉内生真菌的生长情况 1．材料与方法 菌号 菌落大小 cm 菌落颜色 边缘形状 产色素 1．1供试材料 Strainnumber Colonysquare Colonycolor Edge Pigment 1．1．1蛇足石杉 试验用蛇足石杉 Huperziaserrata07hunb Trev 由 江苏省药用植物生物技术重点实验室提供 。 4l5—40 2．5×2．8 灰白色 稍不整齐 无 1．1．2培养基配制 419-38 3．5×4．5 橘黄色 稍不整齐 无 1．1．2．1固体分离培养基 PDA 的配制 试验用 PDA制备采用新鲜 马铃薯 200g，切块煮 30min，过滤取上清液加葡萄糖和20g琼脂，蒸馏 412—14 8．O×8．6 白色 整齐 无 水定容至 1000mL，pH 自然，121℃高压灭菌 20min。 414—4 1．6×2．0 橘黄色 稍不整齐 无 1．1．2．2TwA+ws培养基配制 纯化及初步鉴定试验采用 PDA培 养基、TWA+WS培养基，TWA+wS培养基的配制方法参见方中达主编 从蛇足石杉中分离得到的内生真菌其菌落生长速度略有差异。在 《植病研究方法》一书。 生长过程中菌落的颜色大都是 白色或者灰白色，偶有橘黄色和黑色出 1．1-3病原性细菌 现，菌落边缘较为整齐，并且很少产生色素。 大肠杆菌 Eseheriehiacoli 、金黄色葡萄球菌 Staphyloermcusau— 表 2部分蛇足石杉内生真菌孢子的形态鉴定 reus 、枯草芽孢杆菌 Bacillussubtills 由江苏省药用植物生物技术重点 菌号 菌丝形态 孢子形态 鉴定结果 实验室提供 。 Identification 1．1．4主要仪器 Strainnumber Mycelialmorphology Sporemoprholoyg result 试验用超净工作台 sw—CJ—IF ，苏州安泰净化厂；全温摇瓶柜 HYG—A ，太仓市实验设备厂；电热恒温培养箱 DNP一9052 ，