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浅谈金银花中绿原酸的致敏性 邱新建 (鲁南制药集团中药制药共性技术国家重点实验室，山东临沂276005) [关键词]金银花；绿原酸；致敏性 绿原酸是金银花中主要的活性成分，有着广泛的药理作用，但它又被怀疑是一种可疑的致敏物 质，关于其致敏性的研究，简述如下。 1国外研究情况 开了研究，对于其是否为致敏原却得出了截然相反的结论，此后国外关于绿原酸基本无报道。Layton 以及他的工作组报道说：他们发现在34例咖啡过敏症病人和近1000例蓖麻过敏症病人中，未发现 有对绿原酸过敏的病人。他们认为生咖啡中的小分子、扩散性的成分不是生咖啡的致敏物质，而可 能是种子中的蛋白。在最近的3次会议中，Freedman以及同事们进一步补充了他们的观点：绿原酸 是一种过敏源，是人血清白蛋白—合成绿原酸结合物和牛血清白蛋白—合成绿原酸结合物致敏的决 定因素，家兔会产生对抗这些结合物的特异性抗体。此外，他们还证明这种结合物能引起有咖啡临 床过敏反应的病人发生过敏反应。 血清，没有发现过敏血清对绿原酸发生反应，绿原酸样品是采用逆流分配色谱制备的(CcDcA样 品)。具体试验过程如下： 样本，一个他们用于早期研究的天然绿原酸样本(S．FCA)，以及绿原酸样本El171。还从chemical houses购买绿原酸样本。这些样本均符合标准。还有少部分为合成绿原酸，这些样品用于病 supply 人的皮试实验，部分病人对生咖啡严重过敏，而少部分病人对生咖啡和蓖麻均严重过敏。取一个天 然绿原酸样本经CCD纯化，作为对照样品，这个样品是从生咖啡中分离得到的，是通过Moores提 到钾一咖啡因复合物方法纯化后，再从水中结晶了两次。结晶苒用乙酸乙酯和10％的氯化钠溶液置 装置中进行分配转移，每个部分放在1个管中。样品(7．5Gm)放在第一、二管中，收集80～115 管的部分，于40D下真空浓缩到500ml，加入异丙醇，过滤(去掉氯化钠)，滤液真空浓缩至干。再 加入异丙醇，充分除去氯化钠。最后将异丙醇溶液蒸干，绿原酸重结晶两次。硅胶层析色谱结果显 示没有其他的杂质，如咖啡酸，绿原酸的异构体，254nm下检视，除了绿原酸以外没有其他的物质， NMR数据显示(吡啶)没有其他的可疑物质存在，说明样品纯度非常高。 实验研究：所有绿原酸样品经过NMR检测确定均为绿原酸，从水蜜桃中分离得到的绿原酸也 检测确定是绿原酸。商品绿原酸样品C4420含有一个污染物，是其他样品不含有的。波谱数据显示 析，所有的样品通过透析后分成两部分，即可扩散性的低分子物质被透析出来(渗出物)，而非扩散 性的高分子物质均留在细胞半透膜中。渗出物用紫外和核磁测定含有绿原酸，非扩散性物质中不含 过敏反应临床实验：取三组有强烈反应的Freedman的病人血清，四组法国病人的血清，用蒸馏 水重新蒸馏。采用这7组血清对志愿者取7个点做皮试实验。致敏24小时后，用绿原酸样品以及他 们的扩散及非扩散性物质对这一系列的点进行皮肤实验。所有的绿原酸样品以及绿原酸渗出物均用 甘油缓冲盐水溶解成1％的溶液，pH值为6．6，非扩散物质用同样的溶液溶解成0．1％的溶液。这些 溶液涂在每个过敏点上，再用7组血清重复致敏，这样就可以把这些溶液引入皮肤中。这些位置每 296 隔0．5小时观察一次，然后测定并照相。结果核磁数据证明所有的样品被确定是绿原酸，被准确地 鉴定为绿原酸的异构体。样品CCD CA做为对照品，不含其他异构体，也不含其他的成分。C4420 样品中含有不确定的杂质，其他样品中不含有SF-CA，由Freedman提供，与El171样品是一样的。 测定结果结合硅胶薄层色谱结果证明样品CCDCA对照品确实是绿原酸。我们早期报道指出样品 CCD CA不是致敏性物质，因此，也证明了绿原酸本身并不是植物的致敏源。临床实验：30名对生 咖啡和(或)蓖麻有严重过敏的法国病人的皮试实验发现对l％的Searpati法合成绿原酸没有过敏反 应，这个结果与我们先前的报道一致，即纯绿原酸以及渗出物没有过敏现象。进行被动过敏的P．K 试验时发现，法国和加拿大的病人的过敏血清对绿原酸的渗出物没有反应，包括S．FCA。非扩散性 物质则有过敏性反应(P．K实验)。 结果与讲座：通过细胞半透膜可以很容易透析除掉绿原酸粗品中的过敏性的污染物，或采用逆 流分配法，用乙酸乙酯和氯化钠溶液进行处理。这些温和的处理不会影响到绿原酸的性质(分子构 型)。