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RAPD和SRAP分子标记在金针菇菌种鉴定中的应用.pdf
2011(2) 惫 嘏萄
RAPD和SRAP分子标记在金针菇菌种鉴定 中的应用
郭钟尧 姜 辉 贾培培 郭立忠
(青岛农业大学应用真菌省级重点实验室 ,山东青岛 266109)
摘 要 试验从分子生物学和形态学角度 ,利用 SRAP和 RAPD 1.2_2 基 因组 DNA提取一CTAB法 【】
分子标记技术对 7个金针菇菌株进行遗传多样性分析。SRAP共 1_2_3 基 因组 DNA纯度检 测一0.8%的琼脂糖凝胶 电泳 将
扩增出 469条 DNA条带。大部分 条带分子量在 200-3000bp, 琼脂糖凝胶移入凝胶成像系统 中,观察并照相 。如果 DNA条
多态性条带为 377条 ,占总条带数 的80.4%,每对引物平均获得
带清晰、整齐、明亮且无拖尾 、点样孔处无发亮 ,表明DNA完
41.9条多态性 条带。RAPD扩增出476个条带。其 中多态性条带
整性好且纯度较高 ,可用作 PCR反应。
为 274条 .占总条带数 的57.6%,每个引物平均获得 343条多态
1_2_4 PCR扩增筛选 引物
性条带。结果证明,RAPD与SRAP分子标记技术在试验 中分别
1.2.4.1 SRAP分子标记技术 应用 8个上游引物 (分别标记
在 以相似 系数 0.91和 0.72为阈值 时 ,7个供试菌株 的分组大致
为 1,2,3,4,5,6,7,8)和 8个下游引物 (分别标记为 9,10,l1,
是相同的。金913和金 l9同源性最大 ,在 2种分子标记技术 中
12,13,14,15,16)合成 64对引物对三个金针菇菌株的DNA进
相似系数分别达到了0.9903和0.8966,表明金 913和金 19可能
行扩增 ,筛选出条带 比较多、多态性较好的引物组合用于试验
是 同物异名 ,而金 405与其他菌株 的亲缘 关系最远 ,其远缘优势
的遗传多样性分析18]。
应在杂交育种中引起重视 。
SRAP反应采用 l6 L扩增体系,各组成成分见表 l。加
关键词 金针菇 SRAP RAPD 聚类分析
完所有试剂后将 Epp管瞬间离心 ,使试剂被收集到管底 。最
文章编号 1000—8357(2011)02—0015—03
后将各管按顺序放入 PCR仪 中。
金针菇[Flammulinavelutipes(Fr.)Singer],学名毛柄金钱菌, 表 1 SRAP反应体 系
又称朴菇 、构菌、冬菇 、毛柄金针菇 、毛柄类火菇 、金菇等 。隶属 试剂 加样量 /IxL
于真菌门、担子菌亚门、蘑菇 目、口蘑科、类火菇属 。金针菇广泛
分布于中国、俄罗
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