RAPD和SRAP分子标记在金针菇菌种鉴定中的应用.pdfVIP

2011(2) 惫 嘏萄 RAPD和SRAP分子标记在金针菇菌种鉴定 中的应用 郭钟尧 姜 辉 贾培培 郭立忠 (青岛农业大学应用真菌省级重点实验室 ，山东青岛 266109) 摘 要 试验从分子生物学和形态学角度 ，利用 SRAP和 RAPD 1．2_2 基 因组 DNA提取一CTAB法 【】 分子标记技术对 7个金针菇菌株进行遗传多样性分析。SRAP共 1_2_3 基 因组 DNA纯度检 测一0．8％的琼脂糖凝胶 电泳 将 扩增出 469条 DNA条带。大部分 条带分子量在 200-3000bp， 琼脂糖凝胶移入凝胶成像系统 中，观察并照相 。如果 DNA条 多态性条带为 377条 ，占总条带数 的80．4％，每对引物平均获得 带清晰、整齐、明亮且无拖尾 、点样孔处无发亮 ，表明DNA完 41．9条多态性 条带。RAPD扩增出476个条带。其 中多态性条带 整性好且纯度较高 ，可用作 PCR反应。 为 274条 ．占总条带数 的57．6％，每个引物平均获得 343条多态 1_2_4 PCR扩增筛选 引物 性条带。结果证明，RAPD与SRAP分子标记技术在试验 中分别 1．2．4．1 SRAP分子标记技术 应用 8个上游引物 (分别标记 在 以相似 系数 0．91和 0．72为阈值 时 ，7个供试菌株 的分组大致 为 1，2，3，4，5，6，7，8)和 8个下游引物 (分别标记为 9，10，l1， 是相同的。金913和金 l9同源性最大 ，在 2种分子标记技术 中 12，13，14，15，16)合成 64对引物对三个金针菇菌株的DNA进 相似系数分别达到了0．9903和0．8966，表明金 913和金 19可能 行扩增 ，筛选出条带 比较多、多态性较好的引物组合用于试验 是 同物异名 ，而金 405与其他菌株 的亲缘 关系最远 ，其远缘优势 的遗传多样性分析18]。 应在杂交育种中引起重视 。 SRAP反应采用 l6 L扩增体系，各组成成分见表 l。加 关键词 金针菇 SRAP RAPD 聚类分析 完所有试剂后将 Epp管瞬间离心 ，使试剂被收集到管底 。最 文章编号 1000—8357(2011)02—0015—03 后将各管按顺序放入 PCR仪 中。 金针菇[Flammulinavelutipes(Fr．)Singer]，学名毛柄金钱菌， 表 1 SRAP反应体 系 又称朴菇 、构菌、冬菇 、毛柄金针菇 、毛柄类火菇 、金菇等 。隶属 试剂 加样量 ／IxL 于真菌门、担子菌亚门、蘑菇 目、口蘑科、类火菇属 。金针菇广泛 分布于中国、俄罗