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#建gf##E学套2011年学术年奢论i亲
等最异丙醇，一加℃静置30rain，12000rpm离心有些地方出现肉变或胰变，按压无弹性；病程长的与
15rain，弃去上清．加人200pL的70％乙醇进行洗胸膜、肋壁粘连，脑充血、小血。
涤，并于4℃12000rpm离心15rain，舟去L清，超净 2 2
音干燥25rain，用30p+LDEPC水溶解沉淀．20℃保
从组织病料中扩增出两个条带．其太小分别为
存。
1 5 RT—PCII 小相符台．见下图1。将该片段克隆于T载体，井经
1 51
RT反应体系：分别取DEPC水125“L， 序列分析结果证明分别为CSFV和PRRSV。
5xMMLVHuffer mixt眦
2ILL，25mgMgc】21“L，dNTP 2 3 4 5 6
inhlbhorO 0 hi3
1止，RNgse 25止，MMLv5灿，随机引
物1p．L，RNA样品模版3¨L。组成10止体系进行
2000
RT反应。RT反应条件为：30。CIOmin；42℃1h；99℃ }雾1
1000
5rain；4℃保存。 750
550
l 5 2CSFV和PRRSV
PCR扩增体系：无菌水
250
132¨L；10×PCRBuffer(含Mgcl2)2“L；dNTPmix—
m№l6pJ．；啊酶04¨1．；上游引物04汕；下游引
物04ILL；RT反应产物2止．组成20止体系进行扩 嫠J
增。CSFV的反应程序：95℃5rain、94℃1rain、50℃
1rain、72tlrain 目I Ill—FCH％*
35个循环，72eClOmin，4℃保存。片
M吐erDL
＆：1 2000．2
段大小：508bp；PRRSV的反应程序：95℃5min，94℃
PBv；5f’cv=6PPV，
月段^∞400iJp；4
Irain、5350C1rain、72℃lmin35个循环．72℃10min．
23细茴学辁查
4C保存。片殷大小：400bp，反应结束后，PCR产物
于1％琼脂糖进行凝腔电泳．采用自动凝腔成像扫 分别取病死猪的肺、肝、脾、肾、淋巴结、脑等组
织进行涂片染色镜检，束发现可疑致病菌；将病料进
描仪进行拍照。PRV、PCV及PPV的检测分别参照
文献’4㈦…。 行常规细菌分离培养，也术见细菌生长。
2．4防控
2 结果 根据临床症状、病理变化及结台实验室诊断，确
诊为猪瘟
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