化学合成ω-芋螺毒素MⅦA的复性和质谱分析.pdfVIP

维普资讯 动 物 学 研 究 2003，Apr．24 (2)：121—126 CN 53—-1040／Q ISSN 0254—-5853 ZoologicalResearch 化学合成 ∞一芋螺毒素 MⅦA的复性与质谱分析 王贤纯 ，梁宋平 (湖南师范大学 生命科学学院，湖南 长沙 410081) 摘要：为了探讨质谱分析在合成多肽氧化复性和分离纯化研究中的应用 ，用固相多肽合成方法合成 m一芋 螺毒素 MⅦA，在含谷胱甘肽的缓冲体系中进行氧化复性后 ，经离子交换和RP—HPLC分离纯化 。利用基质辅助 激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI—TOF—MS)和电喷雾 串联质谱 (ESI—MS／MS)分析m一芋螺毒素 MⅦA氧化 复性和分离纯化的效果 ，最后用电生理学实验测定复性 m一芋螺毒素 MⅦA的生理活性。其结果表明，获得 的 一 芋螺毒素 MⅦA纯化复性样品具有与天然m一芋螺毒素 MⅦA完全相同的空间构象和生理活性。 关键词 ：∞一芋螺毒素 MⅦA；氧化复性 ；质谱分析 中图分类号 ：Q516；0657．63 文献标识码 ：A 文章编号 ：0254—5853(2003)02—0121—06 Renaturation andM assSpectrometricAnalysis0f ChemicallySynthesized∞一conotoxinM ⅦA W ANGXian—chun，LIANG Song—ping (Collegeof Science，HunanNormalUniversity，Changsha 410081，China) Abstract：Inordertoinvestigatetheapplicationofmassspectrometry(MS)intherenaturationandpurificationof syntheticpeptides，∞一conotoxinMⅦAWas chemicallysynhtesizedbyasolid—phasemehtod．ThesampleWas oxidatively treatedinaglutahtione—containingbuffer，andhtenpurifiedbyion—exchangechromatographyandRP—HPLC ．Th erenatu— rationnadpurificationemcienciesofsynhtesized∞一conotoxinMⅦA weresubsequentlynaalyzedbyMALDI—TOF—MSand tandemelectrospraymassspectrometry(ESI—MS／MS)．Meanwhile，usingna electrophysiologicalmehtod，itsbiological activityWas alsomeasured．Massspectrometricandelectrophysiologicalnaalysisrevealedhtatrenaturednadpurifiedct卜 conotoxinMⅦApossessesthesameconformationandphysiologicalactivityas htoseofnatural∞．conotoxinMⅦA． Keywords：~-conotoxinMⅦA；Oxidativerenaturation；Massspectrometricnaalysis (￡，一 芋螺毒素 MⅦA (oJ．conotoxinMⅦA)是来 展和广泛应用。用 固相化学合成法对其进行化学合 源于海洋软体动物芋螺 (Conusmagus)的一种多 成 ，是解决这类多肽毒素天然来源不足的重要方法 肽类神经毒素，含 25个氨基酸残基