猴表皮干细胞横向分化为角膜上皮细胞的研究.pdfVIP

中国科学C辑生命科学2006，36(5)：405—414 405 猴表皮干细胞横向分化为角膜上皮细胞的研究木 高 楠①王智崇①黄冰∽+葛 坚① 陈系古@ 卢 蓉① 张可飞①② 日日 汜．，§刖U范志刚① 卢尸 丽①彭彭 展①崔光辉④ (①中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室，广州510060；②广州医学院荔湾医院，广州510165 ③中山大学实验动物中心，广州510080) 摘要 表皮干细胞可以作为角膜上皮细胞的替代物，在自体眼表修复及组织工程生物角膜的 构建中将产生不可估量的作用．将体外分离培养的2～4代猴表皮干细胞和人角膜缘基质组织及 化学技术对其分化情况进行检测和鉴定．并于第2，4，6，8和10天进行免疫组织化学染色观察表 皮干细胞转分化的比率．实验采用条件培养基诱导法作为对照．表皮干细胞在共培养前表达表皮 干细胞标志，K15和整合素pl阳性，K3／K12阴性；共培养后转为表达K3／K12，从基因水平和蛋 白质水平表现出角膜上皮细胞的特征，但是条件培养基诱导法阳性率较低．可见，表皮干细胞具 有可塑性，在角膜缘基质组织及角膜上皮细胞的调控下，可以横向分化为类角膜上皮细胞，有可 能重建角膜上皮，进行自体生物角膜的构建． 关键词 表皮干细胞 可塑性 角膜上皮细胞 角膜病是主要的致盲眼病之一【1]，仅中国就有4 近10年来，组织工程的兴起给体外构建人工生物 亿人因为角膜病而致盲，目前，同种异体角膜移植是 角膜带来了希望，国内外许多学者做了不少探索[3巧]． 其主要的治疗手段．虽然同种异体角膜移植已经取 多年来，我们一直致力于生物角膜构建的研究，并已 得了成功，但是仍有10％的失败率；此外，角膜损伤 经成功的证明了胚胎干细胞在特定的微环境中可以 严重的患者，移植手术通常失败，例如，严重的眼表 分化成角膜上皮细胞恂】． 化学或物理伤、史蒂文斯．约翰斯综合征等[21；而且， 胚胎干细胞具有多项分化的潜能，可以分化为 适合的供体组织十分短缺，大部分患者常在等待中 多种类型的细胞，是替代治疗的理想细胞．但是，由 延误了治疗． 此弓I发的免疫排斥反应难以避免；此外，胚胎干细胞 收稿口期：2006．01．04；接受日期：2006—03．22 +教育部博士点基金项目(20030558074)、国家“十五”科技攻关计划项目(2004BA720A15)、国家高技术研究发展计划(863计划) +8联系人，E—mail：huangbin92000@hotmail．corn SCIENCEINCHINASer．CLifeSciences 中国科学C辑生命科学 第36卷 的应用存在着伦理学的问题，这些都严重制约着胚 血清、4mmol／L谷氨酰胺、0．4 I．tg／mL氢化可的松、 胎干细胞的应用[7-10]．在本研究中，我们旨在寻找一10_10mol／L霍乱毒素、5 种新的、容易获得的、能够用于自体眼表修复和生物 mol／L腺嘌呤、2×10-11mol／L三碘甲腺原氨酸、5 角膜构建的种子细胞． mol／L异丙肾上腺素、10 gg／mL胰岛素、10_6 ng／mL 目前的研究证实，各种组织中存在着多潜能的 表皮生长因子、100U／mL青霉素和100U／mL链霉 成体干细胞，具有以同一胚层或跨胚层的形式向多 素．以上各种成分中