the重组人ck2β亚基的原核表达纯化和鉴定3guidedownload.pdfVIP

下载本文档

1
0
约2.72万字
约 5页
2015-08-29 发布于安徽
举报
版权申诉

the重组人ck2β亚基的原核表达纯化和鉴定3guidedownload.pdf

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

2000 ; 27 (2) 　　　　生物化学与生物物理进展　　 Prog. Biochem. Biophys. 2·01 · 技术与方法重组人 CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定刘新光　梁念慈1) 　马涧泉2) (广东医学院生物化学与分子生物学研究所 , 湛江 524023) β ( ) 摘要　将构建成功的人蛋白激酶 CK2 亚基 cDNA 的重组质粒 , 转化大肠杆菌 BL21 DE3 , 在 IPTG 诱导下表达. 表达蛋白大多数以不溶形式存在. 6L (约 102 g) 表达菌抽提得到约 20 mg 的可溶性表达产物 , 通过 P11 磷酸纤维素一步层析分离 , 得到 68 mg 纯化蛋白. SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化的蛋白为一分子质量 β β 26 ku的单一蛋白带. 蛋白质印迹结果证明 : 纯化的表达产物与抗人 CK2 抗体可发生特异性免疫反应. CK2 亚 α α β 基对 CK2 有激活作用 , 纯化的 CK2 和亚基在等摩尔混合时即可组成有最大生物活性的全酶. 实验结果有力地证明了克隆表达与纯化的重组蛋白是人蛋白激酶 CK2β 亚基. 关键词　人蛋白激酶 CK2β亚基 , 表达载体 p T77 , 原核表达 , 蛋白质纯化 , 酶动力学分析学科分类号　Q51 , Q55 , Q812 　　蛋白激酶 CK2 是真核细胞中普遍存在的一种 p T77 由美国哈佛医学院的 Tabor 教授[6 ] 惠赠. 信使非依赖性丝/ 苏氨酸蛋白激酶. 它是由两个催 112 　试剂 : 异丙基硫代半乳糖苷 ( IPTG) 为美 (α α) (β) β 化亚基或 ′ 和两个调节亚基组成的不国 Calbiochem 公司产品. 小鼠抗人 CK2 亚基的均一四聚体[1～4 ] . CK2 有两个显著特点[3 ,4 ] : 一是 McAb 由丹麦 Issinger 教授[7 ] 惠赠. A TP , GTP , 硝它既可利用 A TP 也可利用 GTP 作磷酸供体 ; 二是酸纤维膜购自 Sigma 公司 , P11 磷酸纤维素和 P81 它可磷酸化的底物目前有近 200 种 , 底物涉及到细磷酸纤维素滤纸系 Whatman 产品. ABC (AP) 免 32 γ 胞功能的许多方面. 根据克隆的 cDNA 推导出的人疫检测试剂盒购于华美生物工程公司. [ P ]