HIV1跨膜蛋白gp41螺旋结构原核表达及功能研究.pdfVIP

中国生物工程杂志ChinaBiotechnology，2008，28(7)：100一104 及功能研究水 刘 斌何红秋程绍辉料陈慰祖 王存新” (北京工业大学生命科学与生物工程学院北京100022) 融合抑制剂靶点。为开展以gp41为靶点的抑制剂筛选，以HIV一1B亚型病毒基因为模板，通过 PCR、酶切、连接等方法构建得到gp41 表达，经变性和复性后亲扣层析纯化蛋白。经sDS—PAGE鉴定，纯化后蛋白纯度较高。通过非变 5-helix与C．多肽衍生物T-20存在相互作用，为下一步药物筛选模型的建立 性凝胶电泳证明gp41 奠定了基础。 关键词gp41表达纯化T-20非变性凝胶电泳 中图分类号Q786 氨酸替换实验表明，gp41六聚体螺旋束间的疏水作用 HIV一1跨膜蛋白gp4l由345个氨基酸组成，一般 以三聚体形式存在，可分为膜外区、跨膜区和胞质区三 是构成其稳定性的主要因素【4】。六聚体螺旋束结构的 形成直接导致HIV—l包膜与靶细胞膜相互靠近，促使 部分【1|。直接参与HIV．1包膜与靶细胞膜融合过程的 是膜外区，该区域从N端到c端依次为融合肽、N端重 膜融合的发生。 研究发现，gp41序列保守，与人体蛋白无同源性， 复序列(N．te珊inalheptadrepeat，NHR)、c端重复序列 被认为是比较理想的HIV一1融合抑制剂的靶点”J。 (c．te邢inalheptadrepeat，CHR)。NHR与cHR之间有 一个较短的由二硫键连接的环状区域。与NHR和 cHR相对应的多肽分别被称为N．多肽和c．多肽。 在HIV一1包膜与靶细胞膜融合过程中，gp41发挥 唯一一种应用于临床的抗HIV．1融合抑制剂。T-20是 着关键作用。gpl20依次与CD4和辅助受体结合之后， 其构象发生变化，使得被其包裹的gp41暴露出来。由一种长36个氨基酸的C一多肽衍生物，目前主要通过合 成方法获得。R00t等蚓根据蛋白质工程原理设计了由 于失去gpl20的作用，gp4l发生构象变化，形成中间过 5一helix以及由3 渡态前发卡结构[21。gp41N端的融合肽插入靶细胞膜 3个N一多肽与2个C．多肽构成的gp41 中，然后三股cHR以反向平行的方式包裹住三股个N-多肽与3个C．多肽构成的gp4l6．helix，并证明少 5-helix可以与游离的C-多肽结 NHR，并与其疏水凹槽结合，形成六聚体螺旋束结构， 了一个c．多肽的gp4l 合，具有较好的抗HIV一1融合活性。 研究发现膜融合发生于六聚体螺旋束形成之后L3j。丙 为了获得gp4l 收稿日期：2008旬l旬8修回日期：2008卫3．29 靶点的融合抑制剂筛选研究，以HIV-lB亚型病毒基因 ·国家自然科学基金30670497)、北京市自然科学基金 (5072002)、北京市教委资助项目(KM2005lo00500I)资助项目组质粒为模板，通过PcR、酶切、连接等方法构建得到 十}通讯作者，电子信箱：s}mohc@bjut．edu．cIIc)【wang@bjm．edu．cII gp4l 万方数据 2008，28(7