抗硬化复方对硬皮小鼠皮肤TGF-β1表达的影响.pdfVIP

0～2 国科学院上海实验动物中心提供。置于清洁级动物饲养室，2 4℃，普通饲料和水饲 养。 1．2主要试剂 所用BLM购于上海市中西医结合医院药房，由日本化药株式会社生产；0．1MPH7．4PBS 品，Envision试剂购自Dako，为即用型试剂。 1．3实验仪器 SKl旋涡混匀器；叫一60快速恒温数显水浴箱；Ⅻ12—1高速分散器；低速离心机：常 州国华电器有限公司；微量移液器：芬兰；彩色病理图象分析系统：细胞免疫组织化学定量 分析软件。 1．4实验方法 1．4．1硬皮病模型的建立 11 首先把BLM溶于磷酸盐缓冲液(PBS)：200 g／m1，0．22um微孔滤膜过滤。 剃去所有C3H小鼠背部中央区被毛。然后用4．5号无菌注射针于造模组及早用中药组小 u 鼠背部皮下每天注射0．1ml浓度为200g／m1的BLM，共三周。 1．4．2分组及给药方法 PBS对照组10只，以PBS液0．1ml于对照组小鼠皮下每天注射，共三周；造模对照组8 只，造摸成功后每天予0．2ml生理盐水灌胃；早用中药组10只，在开始注射BLM的当天就开 始每天灌胃喂中药，BLbl注射3周后停止，继续给予中药，直到12周后：中药组8只，造 模后每天分别给予0．2ml益气活血温肾方煎剂；西药组8只，造模后每天给青霉胺溶液 0．2ml；中、西药组9只，早上予中药煎剂灌胃，下午予西药灌胃。造模对照组小鼠。用药 过程中除PBS对照组外，其他各组小鼠均有死亡。 药量计算：中药，每只小鼠的给药剂量按人剂量的10倍计算，成人每日益气温肾活血 方用生药为3．49／kg体重，推至小鼠为每日349／kg体重，则体重209的小鼠需每日以 3．49／ml浓度的益气活血温肾方煎剂0．2ml灌胃。 西药，每只小鼠的给药剂量按每kg体重占有体表面积的相对比值与人进行换算得出。 成人每日青霉胺一般为5mg／kg体重，换算为小鼠用量为62．5mg／kg，体重209小鼠每日予 浓度6．25mg／ml青霉胺溶液0．2ml灌胃。 1．4．4标本收集 喂药12周后，在造模小鼠背部皮肤最厚的部分取样本皮肤，切成两块。一块同定于10 ％福尔马林液，再石蜡包埋。另一块速冻于液氮中，并立刻低温储藏(--70℃)。对照组在 注射区取皮肤，处理同上。 1．5检测项目与方法 免疫组化法测定皮肤组织中TGF-量1含量，造模对照组和造模后用药组随机取6个标本 进行检测。计算出每只小鼠的免疫组织化学指数。免疫组化指数=(阳性面积值X阳性强度)。 再用SPSS统计软件分别求得PBS对照组，造模对照组，早用中药组，中药组，西药组及中 西药组该指数的均值和标准差(又±S)。 2．统计学处理 所有数据均用均值±标准差(又±S)表示，应用SPSSl3．0统计软件进行方差齐性检验 和单因素方差分析。 3．结果 各组小鼠皮肤TGF—B 1免疫组化指数的比较(见表)。造模对照组}LPBS对照组小鼠皮肤 该项指数均有明显增加，差异有1F常显著意义，PO．01。各用药组较造模对照组小鼠皮肤该 项指数又明显减少，差异有非常显著意义，PO．01，其中早予中药组、中药组和中西药组较 西药组小鼠皮肤该三项指数减少的趋势更明显，有统计学差异，PO．01。但中药组、西药组、 中西药组比PBS对照组的小鼠皮肤该指数仍高，有显著性差异，PO．05，其中早予中药组TGF— Bl免疫组化指数较PBS对照组小鼠皮肤该指数稍高，无统计学差异。见附图。 表．小鼠皮肤TGF-13l免疫组织化学指数的比较(jiis) 正常对照组 1029198．67±2374．58 造模对照组 6 128446．134-8793．46 40795．974-5743．57△△ 早中组 8· 91056．