凝血酶引起人支气管上皮细胞内活性氧及血小板源生长因子-AB分泌的改变.pdfVIP

主 堕 盘查 皇 年6月第5卷第3期 ChinJAsthma(ElectronicEdition)，June2011，Vo1．5，No．3 ·19 · ． 论 著 ． 凝血酶引起人支气管上皮细胞 内活性氧 及血小板源生长因子一AB分泌的改变 曹守冬 肖伟 【摘要】 目的 探讨凝血酶对永生化人支气管上皮细胞 (BEP2D细胞)内活性氧产生及血小板源生 长因子一AB(PDGF—AB)分泌的影响。方法 不 同浓度凝血酶刺激指数生长期的BEP2D细胞 ，通过检测 氧化型氢化乙啶及二氯荧光素荧光强度测定活性氧簇含量变化。采用双抗体夹心 EIISA法检测 BEP2D细胞分泌PDGF—AB的变化。结果 随着凝血酶浓度增加，反应体系中活性氧明显升高，且有明 显的剂量反应关系 。凝血酶处理组 BEP2D细胞上清液 中 PDGF-AB含量较对照组上清液显著升高 [(770．33+24．29)ng／IVS(117．42±1O．85)ng／L，Pd0．01]。凝血酶在一定范围内有剂量反应关系。 1Ou／ml凝血酶刺激 48h后 BEP2D细胞分泌 PDGF—AB量最大[(817．63+22．53)ng／L]。结论 凝血 酶既可以引起细胞 内氧化应激导致基因毒性 ，又可 以通过刺激 BEP2D细胞分泌 PDGF-AB发挥 自分泌 及旁分泌作用 。 【关键词】 凝血酶；永生化人支气管上皮细胞；活性氧簇；血小板源生长因子一AB Changesofreactive oxygen speciesand platelet—derived growth factor-AB caused by thrombin in human bronchialepithelialcells CAOShou—dong ，XIAOWei． DepartmentofEmergency，GeneralCoal Hospital，Beijing100028，China [Abstract] 0bjective Toinvestigatetheeffectsofthrombinonreactiveoxygenspeciesandplatelet- derivedgrowthfactor-AB (PDGF-AB)inimmortalizedhumanbronchialepithelialcells(BEP2D cells)． Methods BEP2D cellsat exponentialgrowth phasewere stimulated by different concentrationsof thrombin．Thecontentofactiveoxygenspecieswasdeterminedbydetectingthefluorescenceintensityof hydroxyethidium and dich1orofluorescein．ThechangesofPDGFAB weremeasuredbydoubleantibody sandwichELISA assay．Results Withtheincreaseofthethrombinconcentration，reactiveoxygenspecies significantlyincreased，and therewasa dose-responserelationship．The concentration ofPDGF-AB in culturesupernatantsinthrombin-treatedgroupwashigherthanthatincontrolgroup[(770．33+24．29)ng／LVS (117．42+1O．85)ng／L，P0．01]，andtherewasadose—responserelationship．Theconcentrationof PDGF-ABwasmaximal[(817．63+22．53)ng／L]whenBEP2D celiswerestimulatedwith10U／ml thrombinfor48hours．Conclusions ThrombincaninducecellularoxidativestresstOleadtOgenotoxicity， andplayautocrineandparaerinerolebystimulat