注射用头孢哌酮钠细菌内毒素检查法的应用研究.pdfVIP

中国药品标准2001年第2卷第3期 ●方法学交流● 注射用头孢哌酮钠细菌内毒素检查法的应用研究 高丹玲 林秀明 陈引秀 (福建省药品检验所 福州350001) 摘要 目的：探讨注射用头孢呱酮钠细菌内毒素的检查法。方法：同时采用凝胶法和终点显 色基质法。结果： 当样品浓度大于2．5mg／ml时，对两法均显示不同程度的抑制作用，当样品浓 度小等于2．5mg／ml时，对两法均无干扰。结论：在注射用头孢哌酮钠细菌内毒素的检查中，最 佳浓度≤2．5mg／ml，而采用终点显色基质法能定量测定内毒素的含量。 关键词注射用头孢哌酮钠；细菌内毒素检查法；凝胶法；终点显色基质法；抑制作用 头孢哌酮钠是第三代头孢类广谱抗生素。2000ml，而入min一0．03 年版中国药典将其列入细菌内毒素检查法扩大应 用的品种中。本文将采用凝胶法(半定量法)和显色 0．125 其质法(定量法)，探讨注射用头孢哌酮钠的细菌内 (二)供试品溶液的制备吸取5ml细菌内毒 毒素检查法的应用，并对两种方法进行比较。 一、材料 (一)实验材料凝胶法鲎试剂(入一0．25Eu／ ml，批号：990718，规格：0．5ml／支，入一0．125Eu／用。 mI，批号：990910，规格：0．5ml／支，福州东方鲎试剂(三)含标准内毒素的供试品溶液制备将细 厂出品)，显色基质法鲎试剂盒(批号：990701，福州 东方鲎试剂厂出品)，细菌内毒素国家标准品(批 号：981，中检所提供)，注射用头孢哌酮钠(中美合 资苏州中化药业有限公司出品，规格：lg／瓶，批号 0．25Eu／ml，0．125Eu／ml。 分别为9810001，9810002，9810003)及细菌内毒素(四)干扰实验 检查用水(规格500m|／瓶，福州东方鲎试剂厂生 1．凝胶法 产)。 (1)复核鲎试剂灵敏度。 (二)仪器旋涡混合器、恒温水浴箱、比色用 723分光光度计、定量移液器若干支等。 试剂，然后再加入(三)中各组系列浓度的内毒素溶 (三)器材去热原所用玻璃器材清洗干净后 经250℃干热2小时去热原，塑料制品在NaOH酒相对应的供试品溶液做阴性对照管，封口置37℃恒 精溶液中除热原后，以无热原水清洗干净，于60℃ 温水浴箱中，1小时后取出判断结果。 烘干备用。 2．定量法 二、实验方法 (一)内毒素限值(L)计算根据公式L—K／ M，K为内毒素阈剂量(K=5Eu／kg·h)，M为人用 的小试管中，每一浓度平行做2管，于37℃水浴20 最大剂量(M=100mg／m1)，计算得L=0．05Eu／ mg。目前市售鲎试剂灵敏度入max=1．0Eu／ml，则分钟，取出置冰水浴中加入鲎三肽50弘l，37℃水浴 3分钟，取出在冰水浴中加入500弘1亚硝酸钠盐酸 干扰实验的起始浓度Cmax一入max／L一20mg／ 中国药品标准2001年第2卷第3期 溶液终止反应，然后顺次加入氨基磺酸铵和萘乙二 表1注射用头孢哌酮钠的干扰实验(凝胶法) 供试品浓度(mg／m1) 内毒素浓度(Eu／m1) 胺溶液各500p1进行显色反应，后于波长545nm处 l 0．5 0．25O．125 比色。以对照管调零，测得吸光值A。设内毒素浓度 (一) 值为x，相应的吸光度值A为y，得直线回归方程Y 20．0(原液) —ax+b，ro．980。每次实验均伴随标准曲线的制 定，以确保实验结果的可信性。