黑线仓鼠4.5S RNA cDNA的克隆及序列分析.pdfVIP

第37卷 第3期 曲 阜 师 范 大 学 学 报 VoI．37 No．3 2011年 7月 Journal of Qufu Normal University July2011 黑线仓鼠4．5SRNAcDNA的克隆及序列分析 卜凡莉， 靳 鹏， 薛慧良， 徐金会， 徐来祥 (曲阜师范大学生命科学学院，273165，山东省曲阜市) 摘要：4．5SRNA是一种特异存在于啮齿类细胞中丰富的核小RNA分子(smallnuclearRNA，snRNA)． 研究以黑线仓鼠(Cricetul barabens~)为材料，从新鲜肝脏中提取总RNA，以此反转录4．5SRNAcDNA序列， 并克隆测序，所得核苷酸序列为88bp(Genbank登录号：HM146085)．将该序列与啮齿动物中其他物种的4．5s RNA序列进行同源性分析，系统进化分析结果与物种亲缘关系的远近基本一致，表明该研究所得到的4．5S RNA基因序列可作为研究物种亲缘关系或遗传距离的标记．此结果为进一步研究黑线仓鼠4．5SRNA的分子 结构及其生物学功能奠定了基础． 关键词 ：黑线仓鼠；4．5SRNA；克隆；序列分析 中图分类号：Q951 文献标识码 ：A 文章编号：1001-5337(2011)03-0065-05 4．5SRNA基因属于一种逆转座子，起源于7S 尾短，背部中央有一条黑色或暗褐色纵纹．主要栖息 RNA，其转录物存在于核内基质中¨J，是一种特异 在野外，多活动于耕地内和路旁、荒滩地等处，一般 存在于啮齿类细胞中丰富的核小 RNA分子 (small 不迁入农家．该鼠食性杂，以小麦、玉米、豆类等作物 nuclearRNA，snRNA) ’4J，它最早从RNA肿瘤病毒 的种子为主要食料，杂草籽次之，还取食少量昆虫和 中发现，随后在小鼠(Musmll,Sclzlll,$)和金仓 鼠(Me— 植物茎、叶、根等 ．近几年来，对黑线仓 鼠的研究 socricetusauratus)细胞 中分离得到 ．4．5SRNA全 多集中在生理生化、种群生态学和医学方面，从分子 序列含有94个核苷酸，G含量较高，达到40％_5’。J． 生物学方面对该 鼠的研究却很少．鉴于4．5SRNA 对从病毒感染和非感染的哺乳动物以及鸟类细胞中 基因的重要作用，本研究以黑线仓鼠为材料，提取新 获得的小RNA分子进行分析，结果发现非病毒感染 鲜肝脏总RNA，采用RT—PCR方法从总RNA分子中 的大鼠(Rattusnorvegicus)、小鼠和金仓鼠细胞包含 扩增出4．5SRNAcDNA，并克隆到pUC19质粒载体 相同的4．5SRNA分子，而人、猴、猫、貂、兔和鸡细 上，双酶切鉴定并进行测序． 胞中无4．5SRNA分子 J．Harada等对小鼠和金仓 鼠4．5SRNA序列进行了分析，并提出了可能的二 1 实验材料与方法 级结构 ；Li等发现 4．5SRNA基 因序列与 7S RNA、B1和Alu序列高度同源，可能是B1家族的成 员 ，而迄今为止的研究表明，B1IS]、Alu_9m等逆 1．1 材料 本研究于2009年春季在山东省曲阜市吴村镇 转座子在细胞中执行多项重要功能，在基因表达调 控和基因组进化方面扮演着重要角色，因此可 以断 采用铁笼活捕法捕获黑线仓 鼠，乙醚麻醉法处死后 定4．5SRNA基因也将会有重要的生物学功能．但 取其新鲜肝脏，于一7O℃ 保存备用． 是，至今对它的研究还仅限于少数物种，对黑线仓 鼠 1．2 总 RNA的提取 (Cricetulusbarabensis)4．5SRNA及其基因的研究尚 采用异硫氰酸胍方法制备总 RNA