产毒真菌的检测方法.pdfVIP

产毒真菌的检测方法 产毒真菌大部分属于曲霉菌、青霉菌属和镰刀菌属中的一些种，这些霉菌在自然界分布广泛， 对储粮、动物饲料和食品侵染的机会较多，通过检测这些霉菌和毒素反映食品的安全性。 1、材料和试剂 （1）、器材：温箱（25—28℃）、目镜测微尺、物镜测微尺、显微镜、超净工作台、放大镜、三 角瓶、试管、平皿、酒精灯、载物玻片、盖玻片等。 （2）、培养基和试剂：察氏培养基、马铃薯一葡萄糖琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基、玉米粉 琼脂培养基、灭菌蒸馏水、乙醇。 2、方法 （1）、采样采取有代表性的样品250—500g，尽快检验。 （2）、表面除杂菌如为粮粒样品，取样品10—20，放入灭菌的150ml三角瓶中，无菌条件下加 入无菌水超过样面1—2cm左右，塞好塞子充分振摇1— 2min；将水倒净后，再加水振荡，反 复洗涤10次，弃去水后。将粮粒倒于无菌平皿中备用；原粮样品应先用75%酒精浸泡1—2min， 脱去粮粒表面蜡质，倾去酒精后，再用上法洗涤，备用。 （3）、接种与培养：用无菌镊子将 已处理好的粮粒胚部向下，均匀地插种在高渗察氏平板上（粮 粒的一部分插 入培养基中）、，小粒样品如大米接种10粒/皿，大粒的样品如玉米、大豆等接种 5粒/皿，每份样品须接种100粒。将种有样品的平皿置25—28℃孵箱培养 5—7d，培养后期应 每天观察菌落生长情况，以免生长较快的霉菌将其他的菌覆盖，影响观察及检验结果。 （4）、计数：记录100粒粮食中长霉菌的数量，同时记录每一粒所生长的霉菌数，计算霉菌侵 染的粒数和菌落生长的总数。在计数时，只计数与粮粒相连接的菌落。 （5）、镜检与初分离：用接种钩在平皿上钩取一小块稍带少许培养基的培养物，放在已滴加1 —2滴乳酸苯酚液的载玻片上，再用两支接种钩轻轻地将培养物分开，然后盖 上盖玻片，先在 低倍镜下找到培养物。再将显微镜的聚光器位置降低，光圈调小，转至高倍镜下观察。如为曲 霉属可见典型的分生孢子头；青霉属的真菌镜下可见有 鉴别意义的帚状枝；而镰刀菌属可见镰 刀状的大分生孢子等。将它们分别转种于相应的鉴别培养基平板和斜面，25—28℃孵箱培养5 中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载 体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推 动化工行业的发展。 科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。 —14d。 （6）、常见产毒霉菌鉴定：霉菌的鉴定主要依靠形态特征，包括菌落特征和镜下特征。需观察 的镜下特征包括霉菌的菌丝和孢子的形态和特征、孢子的排列等，并详细记录。 3、实验结果 常见真菌菌落特征如下： （1）、菌落生长的速度：用培养一定天数的菌落直径大小来表示霉菌生长的速度，也可用局限 生长表示生长速度慢，蔓延生长表示生长速度快。 （2）、菌落的颜色：霉菌菌落的颜色应包括菌落表面的颜色、菌落背面的颜色、菌落周围培养 基的颜色，以及霉菌在不同生长阶段的颜色变化。 （3）、菌落的质地：根据菌丝的长短、疏密以及孢子的有无和多少，菌落的质地可为绒状、絮 状、绳状和束状。 （4）、菌落的表面：疏松或致密，平坦、凹陷或隆起，有无皱褶，有无放射状或同心环状的沟 纹，边缘是否整齐等。 （5）、渗出物：有的菌种常常在菌落表面出现带颜色的似液体物即为渗出物，记录其色调和分 泌的量。 （6）、气味：是否出现除霉味以外的其他特殊的气味。 （7）、菌丝：由孢子在环境适合情况下长出的芽管延长而成，可长出许多分枝，形成交织成团 状的菌丝体。在显微镜下为或粗或细、有隔或无隔的、具分枝的结构。有的皮肤感染的真菌会 形成螺旋状、球拍状、结节状、鹿角状及梳状等具鉴别意义的特殊菌丝。但粮食中真菌的菌丝 一般无鉴别意义。 （8）、孢子：是真菌的繁殖器官，一条菌丝上可长出多个孢子，当环境条件适合时，孢子又发 芽发育成菌丝。根据产生孢子的方式不同，分为有性孢子和无性孢子两类。有性孢子有接合孢 子、卵孢子、担孢子和子囊孢子；无性孢子有分生孢子、孢子囊孢子、叶状孢子（包括芽生孢 子、厚膜孢子和关节孢子）、。在产毒霉菌鉴定中后者更有意义。 中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载 体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推 动化工行业的发展。 科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。