细菌内同源重组法制备FMDV聚蛋白编码基因重组腺病毒.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # ##% ## 年 月 日 #$$ ! ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! ’()*+ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 细菌内同源重组法制备!#$ 聚蛋白编码基因重组腺病毒 ，， - # % # - - - 张兴旺 ，王 勤 ，柳纪省 ，殷相平 ，李志勇 - （中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业部畜禽病毒学重点开放实验室 兰州 /%$$! ） # % （兰州大学生命科学学院 兰州 /%$$$$ ） （甘肃省人民医院检验中心 兰州 /%$$$$ ） 摘 要：采用 方法从重组质粒 中扩增出 的聚蛋白（ ）编码基因，再亚克隆至腺病毒穿梭质 H0I (JK-,42LHH MJKN HH 粒中，形成重组穿梭质粒)(’O40JNLHH；将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架载体通过在大肠杆菌内质粒间同源重 组获得重组腺病毒质粒 。将腺病毒载体线性化后用脂质体介导转染 细胞从而获得含有口蹄疫病毒 )(’OLHH #.% HH 编码基因的重组腺病毒。通过倒置显微镜观测，可见明显的细胞病变，利用荧光显微镜可观测到报告基因绿色荧 光蛋白的表达，并在电镜下观察到 的空衣壳。结果证明已成功获得了含有口蹄疫病毒 编码基因的重组 MJKN HH 腺病毒)’OLHH，并成功表达组装MJKN 空衣壳，为MJKN 腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 关键词： ；聚蛋白；编码基因；同源重组；重组腺病毒；空衣壳 MJKN 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） P/, Q,1# ’ $$$-4#$. #$$ $#4$##%4$1 口蹄疫（ ， ）是由口蹄 高其免疫效力。为安全、高效的 活载体疫苗的 M@@A47O46@9A? O*R37R3 MJK MJK 疫病毒（ ， ）引起的 研究奠定基础。 M@@A47O46@9A? O*R37R3 S*)9R MJKN 偶蹄动物的一种急性、高度接触性、发热性传染病， % 材料和方法 以传播迅速、感染率高而著称。被国际兽医局列为 ’ 类传染病之首。该病毒宿主范围广，可以感染#$ % % 材料 个科近 种动物，尤其对牛、羊、猪的威胁大。目 载体、菌种和细胞：