核盘菌arom基因的克隆和其在酿酒酵母中的表达.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # ! ’ !( 年 月 日 $%% $ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! )*+,-.,/ $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 核盘菌 $’(. 基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达 ， # $ # 于寒颖 ，杨 谦 # （哈尔滨工业大学生命科学与工程系 哈尔滨 #4%%%#） $ （大庆石油学院石油工程系 大庆 ##2） 摘 要：核盘菌（ ） 基因已经被克隆、测序。该基因编码的 蛋白是芳香族氨基酸合成 !#$%’()(* +#$%’(%,- *%- GHIJ 途径中催化第二步到第六步的五功能多肽。为了对扩增的核盘菌 *%- 基因进行功能验证和探索大量获得GHIJ 蛋白的成熟方法，克隆了*%- 基因的编码框序列，并将其与载体K:7L$ 连接，构建了酵母表达载体 K:7L$3.,F8。 用 方法将该表达载体转入酿酒酵母 （ ）中。酶活测定、 和 M9GCN LLOPGNQ7R S#42 !*.*%-/$+ $%$0(+(*$ S#42 H03QTH 杂交结果显示，核盘菌 基因在酿酒酵母胞内获得了表达，转化子具有 蛋白结构域之一 烯醇 PF,@?*,; *%- GHIJ 43 丙酮酰莽草酸33磷酸合酶的催化活性。不同培养时间取样样品的酶活检测结果表明，当转化子在%U 的条件下， 在 酵母尿嘧啶营养缺陷型选择培养基中以 被振荡培养时，其外源 蛋白的 烯醇丙酮酰莽草酸 LT3V #2%,N89; GHIJ 43 磷酸合酶酶活在培养 达到最高。 33 ($? 关键词：核盘菌； 基因；基因表达；酿酒酵母 *%- 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） W(2# G %%%#3$%6 $%% %#3%%!3%4 核盘菌（ ）是一种植物病原 氨基酸饥饿控制，表达量低，因此从原菌体中难以分 !#$%’()(* +#$%’(%,- 真菌，能够侵染大约 种植物，其中包括了大量农 离纯化出足够用于结构和功能研究的