抗拟除虫菊酯类农药广谱性单克隆抗体的研制及鉴定.pdfVIP

第42 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)　 研究报告 第9 期 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 2014 年9 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1245 ~1251 DOI:10.11895/j.issn.0253-3820.140081 抗拟除虫菊酯类农药广谱性单克隆抗体的研制及鉴定 1,2 1 1,2 1 1 ∗1 文孟棠 　 刘 媛　 闫 帅 　 张 霄　 王 恒　 刘贤金 1(江苏省农业科学院食品质量安全检测研究所,南京210014) 2(西北农林科技大学食品科学与工程学院,杨凌712100) 摘　 要　 制备了抗拟除虫菊酯类农药(Pyrethroids)的广谱性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性;以间苯氧基 苯甲酸(PBA)为半抗原,用活性酯法将其与牛血清蛋白(BSA)偶联制得人工抗原 PBA-BSA 免疫 Balb/ c小 鼠,5次免疫后选择效价最高、对PBA识别能力最强的小鼠取脾细胞与SP2/ 0骨髓瘤细胞在PEG1500作用下 融合,经间接ELISA筛选及有限稀释法进行亚克隆,分离阳性细胞株,腹水诱导法大量制备单克隆抗体,并用 Protein G亲和柱纯化,间接ELISA法测定抗体效价、亚型、亲和力常数及对拟除虫菊酯类农药的作用;UV结 果显示,PBA-BSA成功偶联,获得1株稳定分泌抗拟除虫菊酯类农药单克隆抗体的杂交瘤细胞株4H11,其培 6 × × 养腹水抗体效价为1∶6.5 10 ,其抗体亚类为IgG1,对PBA 的亲和力常数为2.5 10 L/ mol,对PBA 的IC 为 50 208.9 μg/ L,检出限为21 μg/ L,对高效氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氰戊菊酯和氯氰菊酯的IC 分别为 1.01, 50 2.15,3.16和3.67 μg/ L。 关键词　 拟除虫菊酯类农药;广谱特异性;单克隆抗体;酶联免疫吸附法 1　 引　 言 拟除虫菊酯(Pyrethroids)是一类杀虫谱广、高效、低毒、残留少的合成杀虫剂,被广泛应用于农业领 域中的害虫防治。 但其残留期较长,对某些非靶标生物毒性很高;通过食物链进入到机体后对哺乳动物 [1,2] 的生殖、免疫和心血管有毒副作用 ,联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)已对它们在蔬 [3] [4] 菜和水果等上的残留做了严格限量 ,我国也对不同拟除虫菊酯类农药做了相应的最大残留限量 。