丝状真菌表达系统在thaumatin基因工程中的优化.pdfVIP

2饼B年9月 北京联合大学学报(自然科学版) s叩、2003 unl。Jl scjences) Vol17N03sumNo．53 第17卷第3期总53期 J0urn一盯ReUinguniv邮i‘y(Nmural 丝状真菌表达系统在thaumatin基因工程中的优化 裴凌鹏1，孔建强2，赵琦2 (1北京联合大学应用文理学院，北京100083；2首都师范太学生物系，北京100037) [摘要]在thaunlatin重组生产中，丝状真菌是最成功的表达系统，十几年来，为了最大程度地 获得重组lhaumaIin，人们对丝状真茵表达系统进行了各种优化，如选用特异性强启动子、增加基因 拷贝数、利用蛋白酶缺陷株、进行基因融合、优化反应条件等。随着丝状真菌表达系统的优化，重 组lhaumⅡn的产量也随之提高。 [关键词]丝状真茼；表达系统；启动子；优化 503 [中圈分类号】Q [文献标识码】A [文章编号】l∞5．0310(2003)03—0075-03 1l¨mtin“’2’是～种超甜蚤白，它是从一种西源基因表达系统。尤其是近年来，随着丝状真菌转 非植物豫d“，№fwDccⅥ如础删BenIh的果实中分离化技术的迅猛发展，许多丝状真菌被应用到工业、 出来的。它无毒、安全、多食不会引起肥胖和龋齿， 农业、医药行业中，生产出了许多真菌或非真菌来 是最有希望替代蔗糖的甜昧剂。但由于豫。ⅡmⅡm． 源的重组蛋白，如葡糖淀粉酶({5l∞㈣yhse)、牛凝 乳酶原(bovinechymsin)、人体乳铁蛋白(hum且nl∞t一 c。cn“幽一枷“Benlh的生长条件极其苛刻，使得通 0feJTin)、鸡蛋清溶菌酶(hen 过豫aMn砬￡蝴埘如毗口“提取th8um砒；n变得十分 e职一whitelys“yme)和 困难，于是人们便把希望寄托在chaum妇的基因工人体自细胞介素6(hu舢nin把de出n一6)等。由于 程上。迄今为止，人们已利用了数十种微生物去生 在其他微生物中生产thau№曲不是很成功，因此人 们便尝试用丝状真菌去生产thaum8tin。从20世纪 产Ihaumalin，但结果令人十分沮丧，得到的表达产 物不仅产量低，而且没有活性，人们又把目光投向 90年代至今，利用丝状真菌生产tIl“m乩iⅡ取得了 了新的表达系统。 前所未有的成功，丝状真菌表达系统在thaumlin基 丝状真菌作为转化的宿主菌，有许多其他微生 因工程中日趋优化，发展到今天，利用丝状真菌生 物如细菌、酵母等不可比拟的优点：1)丝状真菌具 产thaum‘in正成为一个新的研究领域。 有很强的分泌胞外蛋白的能力，而细菌表达的重组 短短十几年时间，利用丝状真菌生产t}laum． 蛋白往往以无活性的、难溶的包含体形式存在；2) tin，产量从几毫克每升上升到一百多毫克每升，这 当细菌表达外源真核基因时，因其翻译和转录不同 和丝状真菌表达系统在th“mnn基因工程上的优 于真核生物，因此即便真核基因转入细菌，也有可 化不无关系。丝状真菌表达系统的优化包括选用 能不表达，但丝状真菌不存在类似的情况；3)丝状 强启动子、增加基因拷贝数、利用蛋白酶缺陷株、进 真菌能对表达蛋白进行正确的翻译后加工，包括肽 行基因融合、优化反应条件等，下面将分别叙述。 链的剪切和糖基化等翻译后加工；4)丝状真菌具有 l启动子 像细菌一样的快速繁殖能力和短的生活周期，比动 植物的细胞培养要简单；5)许多丝状真菌，如黑曲 用强的启动子能增加外源基因在丝状真菌中