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第 31卷第 2期 郑州牧业工程高等专科学校学报 VoI．31No．2 2011年 5月 JournalofZhengzhouCollegeofAnimalHusbandryEngineering Mav2Oll 利用反向PCR克隆猪圆环病毒 2型全基因组 郑 鸣，王 静，郑宝亮，张晓根 (郑州牧业工程 高等专科学校 生物工程 系，河南 郑州 450011) 摘要 ：参照 GenBank数据库中PCV一2的ORF1基因序列，设计 1对特异性引物和 l对为反 向引物，利用常规 PCR 扩增 ORF1基因片段 ，再利用反向PCR扩增 ORF1基因片段侧翼序列，将 2次 PCR产物克隆测序 ，经 BLASF分析确 认为 PCV一2基 因组序列 。利用 VectorNTI8．0软件将两个序列进行拼接获得 PCV一2全基 因组 。结果表明，克隆到 的 PCV一2全基因组长为 1767bp。 关键词 ：猪 圆环病毒 2型 ；基 因组 ；反 向PCR 中图分类号 ：S852．65 9．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—3111(2011)02—0004—03 Cloningofthecompletegenomeofporcinecircovirus type2byreversePCR ZHENGMing，WANG Jing，ZHENG Bao—liang，ZHANG Xiao—gen (BiologydepartmentofZhengzhouCollegeofAnimalHusbandryEngineering，HenanZhengzhou450011．China) Abstract：AccordingtOtheORF1genesequenceofPCV一2from GenBank，wedesignedapairofprimersforconven— tionalPCR andapairofprimersforreversePCR．ThefragmentofORF1amplifiedbyconventionalPCR andtheflank fragmentamplifiedbyreversePCR wereclonedandsequenced．SequencesofthebothPCR productswereconfirmedtO bethesequenceofPCV～2genomebyBLAST．Then，thebothfragmentsequencesweresplicedtObethecompletege— nomeofthePCV一2．Theresultsshowedthatthesegenomeswereall1767bpinsize． Keywords：porcinecircovirustype2，completegenome，reversePCR 猪圆环病毒 2型(Porcinecircovirustype2，PCV 组全长为 1767bp或 1768bp，这是 由 1042位 (位于 -- 2)是引起断奶子猪多系统衰竭综合征 (postweaning ORF2)核苷酸的缺失或插入造成 的 川。PCV～1 muhisystemicwastingsyndrome，PMWS)和相关疾病 和 PCV一2的基 因组结构是相似的，都含有两个主 的重要病原，1974年德 国学者 Tisher首次在 PK15 要开放阅读框 (0RF)，其 中ORF1编码复制酶相关 细胞中发现 PCV一2[卜 。在 中国，郎洪武等 [4]对采 的 Rep蛋白，该蛋 白氨基酸序列 比较保守 ，是导致 自北京、河北、山东、江西等 7个省(市)的559份猪血 PCV一1与 PCV一2产生抗原交叉性 的主要部 清进行了检测，猪群PMWS抗体的阳性率为 42．9 ， 位[6；oRF2编码是病毒 的主要结构蛋 白[73。PCV 说明PCV一2已在中国一定区域内广泛存在 ，并给养 一 2和 PCV一1之问氨基酸序列 同源性较低 ，差异 猪业造成了巨大的