含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体的制备与表达分析.pdf

． · 1 199 L生ErrI热I带B10T术ECHN通0LOG讯Y…V01．2…2rrIERSIN N—o．2…Mar．，2…01， 1．02．012 doi：10．39694．issn．1009-0002．201 含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒 载体的制备与表达分析 管洁，王秀平，邓瑶，周为民，吴小兵，谭文杰 病毒基因工程国家重点实验室，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，北京100052 【摘要】 目的：制备含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体，为幔病毒载体的进一步广泛应用 奠定基础。方法：克隆构建含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的转基因载体pCS-glue-2A-eGFP，酶切与 和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体；重组幔病毒载体感染A549、Huh7细胞后，用荧光显微镜直接观察 报告基因GFP的表达，或取细胞上清实时检测分泌型萤光素酶的表达。结果：制备了合双报告基因的重组慢病毒载 体，感染细胞后可以活体观察绿色荧光蛋白的表达，也可以快速灵敏地检测到分泌型萤光素酶的表达。结论：所获舍 分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体感染效率高，表达易于活体实时检测，灵敏度高。本 研究为慢病毒载体的广泛应用奠定了基础。 【关键词】 分泌型萤光素酶；双报告基因；慢病毒载体 [中图分类号】Q78 【文献标识码】A [文章编号]1009—0002(2011)02-0199-04 and ofRecombinantLentiviral Development ExpressionAnalysis Vectors GaussiaLuciferaseandGreenFluorescentPro- Containing teinDual Gene Report GUAN施，WANG Wei-Min，形U Wen-Jie Xiu-Ping,DENGYao,ZHOU Xioo-Bing,TAN State forMolecular andGenetic InstituteforViralDiseaseControl Laboratory Virology Key Engineering，National and CenterforDiseaseControland Prevention，Chinese 102206，China Prevention，Beijing recombinantlentivimlvectors Gaussialueiferaseand fluores- 【Abstract]Objective：Toprepare containing green cent dual thefoundationforfurtherwide oflentiviralvector,Methods：We proteinreportgene，andlay application andconstructedthetransfer dual cloned plasmidcontainingreportgene