沙丁胺醇单克隆抗体的制备鉴定及其免疫学检测方法的建立.pdfVIP

维普资讯 动物毒物学 2003年 第18卷 第1、2期 Preparationand Identification of anti—clenbuter0lm onoclonalantibodies Abstract：Objective：toproducemonoclonalantibodies(McAb)againstclenbuterolandtoestablishraDid assayfortheresidesofclenbutero1．Methods：clenbuterolwereconjugatedwithKIH andOVA bv diazotization ．BAIB／cmicewereimmunizedtoproducehybridomacelllineandanti-clenbuterol monoclonalantibodieswereobtained from hybridoma ．Analysesofspecificity ，cross—reactivity and antigenicdeterminantwereconducted ，TheCI waslabeledwith—HRP toestablishEIISA，Result ： Obtainedfourhybridomacellline 1H5 1H7 1D6and 2F10．Thetitrationofculturesupernatantsof IH5and1H7areallabove1：2000andascitesfluidallabove1：10．1D6showed3．9895／crossrection with Salbutamo1．A solidphaseantibodyEIISA wasestablished． Keywords：clenbuterol；M cAb：hybridoma 沙丁胺醇单克隆抗体 的制备 、鉴定及其免疫学检测方法的建立 史利军 张乃生 杨正涛 (军需大学军事兽医系 ，，吉林 ·长春 ，130062) 摘 要 ：本 研 究采 用 碳 二 亚 胺 法将 沙 丁胺 醇 醇胺 ．是人工合成的具有 p：一受体激动剂样作用 (SaIbutamo1．Sa1)分别与钥孔血蓝蛋 白(KLH)、牛血清 的肾上腺素能药物 。此类药物常用于临床治疗 白蛋 白(BSA)和卵清蛋 白(0VA)偶联 ．制备免疫抗原 如哮喘等呼吸系统疾病 。实验证实沙丁胺醇对 (Sal—KLH)、(Sal—BSA)和 包被抗 原 (Sal—OVA)。用免疫 动物具有促进骨骼肌生长 ，减少脂肪蓄积等作 抗原免疫 8周龄雌性 Blab／c系小 鼠，通过 四次免疫后 ． 用 。因而 国内外不少养殖场都非法使用本类药 将 小 鼠断尾采血 ．以包被抗原 包被板 ，用 间接 ELISA 物 。[ 。 法选 出血清具有抗 Sal的高阳性 鼠，取这些小鼠的脾细 8：一受体激动剂种类繁多，但沙丁胺醇和克 胞与 SP2／0细胞 融合 ．通过检测、克隆、筛选等步骤生 伦特罗是其 中最常被滥用 的两种 。由于作为促 产抗 Sal单抗。通过 以上步骤得到 3株具有稳定、特异 生长饲料 中添加 的量远远超过正常 的治疗用 分泌抗Sal的单克隆抗体．分别命名为2A6(A株)、3B3 量 ，所 以可造成残 留，人食用 了含沙丁胺醇等 (B株)、2H7(C株)。应用 3株抗 Sal单抗 ，基 于间接抑 ＆一受体激动剂残留的动物性食品可引起头晕、 制 ELISA方法．建立沙丁胺醇免疫学检测方法。通过 心跳加快 、肌