抗PSMA7单克隆抗体的制备和初步鉴定.pdfVIP

· 180· 抗PSMA7单克隆抗体的制备和初步鉴定 黄淑潘攀政王穗海赵玉梅谭家余李臻 【摘甏】 目的制备抗蛋白酶体a7亚基(磷加队7)的单究隆抗体，为pSMA7的功熊研究奠定蕊础。方法以纯化的重缀蛋白 PSMA7为抗原免疫＆蛆JVc小鼠，逡用杂交瘤技术制备Ⅸ刚b叼单克隆抗体，并用间接EI。ISA法和w砖temblot法对单克隆抗体的 特性进纪鉴定。结票成功建立嚣椿稳定分泌抗髑M解蛋热的攀克隆抗体杂交瘤缨胞撩，分别会名秀B。13秘釉ol。检测杂交瘗 细胞培养上清抗体效价为l：128和l：256，腹求效价为1：25600和l：32ooo。两株单克隧抗体的免痰球蛋自亚类均为IgGl。Wes缸n blot及免疫组化实验证实，两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性PSMA7蛋国。结论成功建立了两株效价高、特肄性好 的抗礤；MA?单克隆抗体杂交瘤细臌，制备的单克隆抗体可甩乎琰渊鬣岛的鉴定，为其生物学功能研究奠定了基础。 【关键镧】P{SMA7蛋白；杂交瘸；抗体，萃竟隐 【中国圈书资料分类号】船92．116 and Prepal毽tiollid嘲ti融娃傩醒t瓢m嘞ocl冁畦朗饿均姆agail酸h糕黻隧琰订睡镀粕li窖瞰 suihai，eta1．School Medical HuangⅪang，panH嗽zheng，W抽g ofotechnology，SouthemUlliversity， 510515，China Guan鼬hou PSMA7 classical 【Ah蜘越喇蒯博确prep嫩thehyb—d∞落celllines崩ng a瘟el蝴ta猡诺ent漆cation《monoclonalantibodi褥(溉Abs)a98inst鞭珏旺A7antig嫩for妇herstudy．M醺轴蠡＆虹』yc确ce w口ein玳ulni嚣ed诵thr咖binantPsMA7 011cethe titerofbloodtakenfromn】ousetailreached1：6400，aceU purified proteh antibody fusi∞、^，as be慨n砌Secellsand andtherlthe cellli玎es an畦一 perfonlled 8ple面c myelo撇cells(S；p2／o)thybddomasecretiI蟮瑚noclonal and 蹦砖鑫g疲娥爱湫熊聂g瞳职糖sc憋蠕《姆i蕊i触髓zy唑羲ll氯蠢涵f魏魏oso南entassay(薹麓SA)．攀iⅡ嘲燃lob蠢nsubtypes titer0fthemonoclomlantibodies wereidentifieda11dmeasuredWestemblot and lirIkedimnm— again8tⅨMA7antigen by analysisenz)啊le nosorbent 觚ercdlfusionand celllinesthat secretedrnonocbnalantibod— a8say，respectively．R嘲lts subclomng，t、，吣hybddDrms协bly ies 898inst糙鹾解anlige摭Were翱eeessf越每曲tain磁：＆13 and theascitesnuid wer；el；128 1；256，andtho辩in werel；25600and1132 hyb喇∞砬cLdturesupernatant b10t a11d s110wedthatthetwoantibodi签caIlbind埘thPSMA7amigend“vedfromhumalleu— a11al