生物制品蛋白质含量Lowry测定法应注意的几个问题.pdfVIP

维普资讯 Stra[tPharmaceutiea1JournalVo113No．42001 生物制品蛋 白质含量 Lowry测定法应注意的几个 问题 张 康 (福建省医药工业公司 福州 350003) 摘要 ：日常工作中刺定生特制品中总蛋白酌舍量常采用Lowry法 由于蛋白盾酌特异性烈厦干扰转质存在．常培刺定站果带皋较置误差 丰文 H刺定时参 愚标准品选择 、干扰物存在酌排除方面甚蛄了提击Lowry渣洲蛄果准璃性酌妊验 。 关键词 蛋白质：舍量洲定；Lowry法；准璃性 中图分类号 ：R927．11 文献标识码 ：C 文章缩号 ：1∞8—3765(g001)040047。l 生物制品的中间体，成品蛋白质含量测定通常 650nm 的测定值相差约0．5 ，而 550nm测定值则 是检验项 目中较难 的一项测定 ，常需要其他方法进 比前者低约 4 。 行独立 的肯定，日常工作 中测定总蛋 白质含量 的方 3 干扰物的存在 法常采用Iowry法 该法是根据福林 酚试剂与蛋白 糖 、醇、酚、钾、EDTA等物质 的存在，对 Lowry 质的显色反应来测定蛋 白质 的含量，囡其灵敏度高 法测定有明显干扰作用，它们的干扰作用表现在增 和操作简便 ，在生化检验领域广泛应用。但是 由于蛋 强或减弱的颜色 ，增强或减弱显色程度 ，还原破坏福 白质的特异性影响及干扰物质 的存在 ，也给本法带 林试剂或产出沉淀等。为了使Lowry测得准确的结 来误差 因此在实际应用中，为提高本法的准确性， 果 ，测定前必须排除干扰物质的影 响，一般用蛋白沉 有如下几个 问题应充分考虑 。 淀的手段去除干扰物质。在具有脱氧胆酸钠的条件 1 参照标准 品 下，用 6 的三氯乙酸可 以定量将蛋白质沉淀下来， I．owry法反应机理是蛋 白质 中芳香族氨基酸酪 然后进行测定。 氨酸、色氨酸及苯丙氨酸把磷钼酸一磷钨酸还原成杂 4 与凯氏定氮结果的比较 多钼蓝而显色。由于不同蛋 白质 中芳香簇氨基酸的 凯 氏定氮是准确和精密的蛋 白质浓度测定法。 含量不同，因而使不同蛋白质的反应强度不同。虽然 有人 比较两法测定生物制品的含量结果 ，凯 氏定氮 历史上一直没用牛血清制备标准曲线 ．但是例如胸 法 比Lowry法高 2．2—2．6倍 ，Lowry法结果远低于 腺制品、转移 因子等 的氨基酸组成远 比牛血清 白蛋 凯氏定氮法的主要原因是制品中芳香氨基酸含量较 白复杂的多，故在实际测定 中应采用与制品同类 的 低 ，由于蛋 白质的特异性影响，牛血清白蛋 白与生物 参考物校正 。 制品的氨基酸组成的差异而使两法结果有较大的差 2 显色波长的选择 异 。 以牛血清 白蛋 白为参照标准的显色液的最大吸 5 讨论 收峰在 750nm 附近，笔者测定了6批不同厂家的生 本文的工作总结表 明，日常工作 中用Lowry法 物制品显色液 的最大吸收峰在 743—766nm之 间， 测定生物制品、半成品的总蛋白质含量时．为提高其 Iowry等认为蛋 白质 的最终浓度为 5-25mg·ml 准确性．测定时的参照标准品以及波长应根据不同 时．波长应选择在最大吸收峰 750nm 附近，对于高 的品种蛋白质 的结构特性通过实验予 以调整和确 浓度 的蛋 白质溶液 ．波长应选择在 500nm 附近。 定 ，同时对干扰物测定前应予以排除。由于Lowry法 Bensadoun等采用改 良Lowry法测定蛋 白质含量 ， 和凯 氏定氮法测定总蛋 白的原理完全不同．两者测 波长选择在 660nm。国外有人认为显色液波长选择 定 的结果相差较大，这一点在 日常工作 中必须要充 在 540—560之 间，笔 者 分别 采 用 750、660、650、 分考虑到。 500nm 的波长测定 了6批制品的含量。750、660、 · 声明 ·