趋化因子受体CXCR4对卵巢上皮性癌生长及侵袭转移影响.pdf

中文摘要 趋化因子受体CXCR4对卵巢上皮性癌生长 及侵袭转移的影响 摘 要 目的：趋化因子是单链小分子蛋白质超家族，是一类使 细胞发生趋化运动的细胞因子，趋化因子行使其功能由趋化 stromalcell．derived 种趋化因子受体，在对卵巢癌的研究中，所观察的14个趋 生理性配体，两者之间有着非常高的亲和力，趋化因子 生物轴在多种肿瘤的播散和器官特异性转移中发挥着重要 的作用。本课题组前期研究发现，正常卵巢上皮不表达 者腹水和腹膜间皮细胞高表达CXCLl2，因此，推测 要的作用。本研究拟在体外实验水平探讨CXCR4表达变化 对卵巢癌腹腔转移的影响。 方法： 将 中文摘要 进行分析。 2稳定表达CXCR4卵巢癌细胞株的建立与鉴定利用脂质 体介导的转染方法， 将真核表达重组质粒 blot和免疫细胞 大培养，所获得的细胞经RT．PCR、Western 化学方法鉴定。 3 生长及侵袭转移的影响 将转染真核表达重组质粒 卵巢癌细胞SKOV3进行体外培养。采用四甲基偶氮唑蓝 100的抑 影响以及CXCR4中和抗体与CXCR4拮抗剂AMD3 种浓度梯度的CXCLl2对三种细胞迁移、侵袭的影响以及 CXCIⅥ中和抗体与CXCR4拮抗剂舢ⅥD3100的抑制作用。 结果： l目的基因CXCIM的PCR产物目的基因CXCR4通过PCR 方法扩增得到一条大小为1059 bp的单一特异性条带，与 CXCR4片段大小相符。 2真核表达重组质粒的提取及测序 真核表达重组质粒 列完全一致。 中文摘要 d后经有限稀释法获得了数个单细 为600“∥ml。细胞转染14 胞，将单细胞进行扩大培养。转染细胞的形态和生长速度未 发生明显变化，伸展速度较未转染细胞慢，将转染真核表达 细胞分别命名为SKOV3／CXCR4和SKOV3／neg细胞。 4稳定表达CXCR4卵巢癌细胞株的鉴定转染细胞通过 RT．PCR、Western blot、免疫细胞化学三种方法进行鉴定。 通过上述三种方法证实转染效率平均为73％。 5 1．t SKOV3／CXCR4细胞增殖，且能被lOCXCR4中和抗体 g／ml 与1ug／ml AMD3 100，细胞的生长未发生明显变化，各组之间比较无统 6 对 CXCLl2．CXCR4相互作用对卵巢癌细胞迁移的影响 CXCLl2使迁移的细 于SKOV3／CXCR4细胞来说，100ng／ml 胞数明显增多，且能被10 la CXCR4中和抗体与l la酌：Ill g／ml CXCR4拮抗剂AMD3 100，细 胞的迁移数目未发生明显变化，各组之间比较无统计学意义 (F=O．41，P0．05)(F=O．62，P0．