产前热应激对仔鼠小肠黏膜组织结构发育的影响.pdfVIP

mICe． words|heat intestine mice stress；small cells；newborn 【Key mueosa；goblet 动物肠道作为机体的重要器官行使着消化和吸收营养物质的双重功能，肠上皮完整性是维持肠 道正常功能的重要结构基础。应激中机体氧化代谢加强，生成了大量氧自由基(OFR)，OFR直接与 多聚不饱和脂肪酸作用导致细胞膜脂质过氧化。使细胞膜通透性和流动性下降，引起小肠黏膜上皮 损伤。肠道消化吸收功能下降。高温为应激因子之一，对动物生产影响极大…，它可使动物胃酸中 毒增加n1，食物吸收和生长下降¨1，动物生长性能下降[4-S]免疫力受损、发病率和死亡率显著升高 的明显损害，引起肠屏障功能产生热应激相关的明显障碍¨olo 杯状细胞是一种典型的糖蛋白分泌细胞，主要功能是分泌黏蛋白．其分泌的黏蛋白释人管腔内 成为润滑性黏液涂布于上皮表面，对上皮具有保护作用¨¨且其分泌的粘液可形成一层具有保护性的 粘液胶，以阻止细菌的穿透，其作为肠道黏膜免疫的重要组成部分。构成肠道黏膜免疫系统的第一 道防御屏障，在抗感染、调节上皮细胞的完整性和外来抗原的免疫应答方面起重要作用，其数量的 变化可以在一定程度上反映消化道的局部免疫状况‘12-131，良好的小肠黏膜结构是养分消化、吸收和 动物正常生长的生理学基础。豚鼠产前420C的热暴露可使新生仔的体重和脑重量显著降低，同时对 产后仔鼠神经细胞和脑的发育有不同程度的延缓¨引。而产前热应激对新生仔鼠小肠形态和免疫功能 影响的报道还较少。所以．本试验通过对孕鼠进行产前热应激，探讨热应激对仔鼠小肠黏膜结构及 肠道免疫屏障发育的影响，以期为高温对动物与人体消化系统发育损伤提供一定的参考资料。 1材料和方法 1．1实验动物 4- 选用健康的KM种小鼠(成都达硕实验动物中心)，雌性体重(254-0．765)g，雄性体重(28 l 的室内条件下，自由取食和饮水。通过观察雌鼠阴部确定发情期。晚上8点将雌雄按2：l比例合笼 交配，次日早晨8点检查雌鼠，出现阴栓或阴道涂片发现精子定为受孕。记为受孕0d，将孕鼠随机 分为2个组，每组各6只，即常温对照组和热应激组(HS组)。仔鼠出生后均按窝由母鼠哺乳，每 窝留仔不多于8只。 1．2产前热应激处理 取健康妊娠雌鼠于胚胎第13d，腹腔注射戊巴比妥钠(0．01ml／g)，麻醉后参照尹锋等¨纠所述在 424-0．31 oC的热应激箱中急性热应激，当孕鼠肛温达到41℃时停止热应激。同法将对照组孕鼠放入 4-0．5)℃的热应激箱中。 内环境为(28．5 1．3仔鼠小肠黏膜组织切片及PAS染色 热应激后将孕鼠分笼喂养，自然分娩后，分别取日龄为l、3、5、7d的仔鼠各6只处死剖取十 二指肠、空肠、回肠各lcm，PBS冲洗，卡诺氏同定液同定12h．70％酒精冲洗并保存。固定后的组 0．5％ 织进行常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋，旋转切片5斗m。切片脱蜡至蒸馏水，常规PAS染色i 水洗，苏木精复染胞核后镜检。显示：糖元颗粒紫红色，糖蛋白粉红色，粘蛋白和粘多糖呈红色。 142 1 4数据采集与方法 坐化．MiE显微图像分析系统(】【陈易创电子公司)测壁备段肠的肠壁厚度、绒毛长度隐窝深度 和黏H#厚度。缚段肠随机选取5张切片，缚张七』J片选取5个最长肠绒毛的长度、』＆深隐窝深度和』最 厚毒占膜厚艇“及最厚肠砖厚度，并取萁平均值．井计数每张四片5根绒毛中每jf)0个肠黏膜柱状细 胞问的上皮内杯状细胞的数量．切¨经YM310数字摄像机(1f『东易创)拍照保仃。 1 5数据处理 著性差异用t榆驻．P005为差异显著。 2结果 21产前热应澈对不同日龄仔鼠小肠黏膜组#l结构发育的影响 如同J所币．热血澈组仔鼠的小肠黏膜结构有不同程度的损伤，肠黏膜上皮细胞向周围散乱，